文档介绍：dna指纹的遗传分析实验报告
DNA指纹的遗传分析
【实验原理】
“DNA指纹”是指可以利用DNA差异来进行与传统指纹分析相似的身份识别。DNA指纹是以DNA的多态性为基础，而卫星DNA的发现则是其最重要的奠基石。卫星DNA是由一mL，冰箱冷藏。
(9)无菌水:蒸馏水或去离子水，高温灭菌。
(10)1mol/L Tris-HCl(): Tris溶解在80mL蒸馏水中，，加蒸馏水定容至100mL。
5(引物
Primer1:5’-GAAACTGGCCTCCAAACACTGCCCGCCG-3’
Primer2:5’-GTCTTGTTGGAGATGCACGTGCCCCTTGC-3’
【实验操作】
2
1(收集DNA样本
(1)先漱口，然后用灭菌的牙签充分擦刮口腔内壁，
装有1mL无菌水的小离心管中，使粘附在牙签表面的口腔细胞悬浮其中(以
能看到悬浮物为好)。震荡10s，10000 r/min离心1min。 (2)从离心管中吸出970μL无菌水，注意不要吸到沉淀。 (3)向离心管中加入200μL 5% Chelex 100，震荡10s混匀。 (4)加入2μL蛋白酶K，混匀，56?保温5min。 (5)剧烈震荡10s,沸水浴8min。
(6)10000r/min离心3min，离心管中溶液分成上下两层:下层为
Chelex100和细胞碎片的沉淀，上层溶液含DNA分子，可以直接用作PCR
模板。
此DNA样本可在4?或-20?保存，必要时可在使用前再次加热并离心，
使管内物质分层。
2(PCR扩增D1S80等位基因
(1) PCR管上做好标记。 (2)准备冰盒，开始反应前尽量使PCR管保持在冰上。 3)依次加入下列成分，配制25μL体系的PCR反应溶液: (
PCR pre-mix
引物1 1μL
引物2 1μL
口腔细胞DNA样本 10μL
加无菌水至总体积25uL。
(4)轻弹管壁，混匀溶液。
(5)离心10s，使管壁上的液滴落下。
(6)按下列程序开始PCR反应:
94?，1 min
,
94?，15s
68?，15s
72?，15 s
30个循环
,
72?，10min
,
4?暂时放置，直至开始电泳 3(PCR扩增产物鉴定与D1S80等位基因分析
(1)准备冰盒。
3
(2)取出完成反应的PCR管，放冰上待用。
(3)取出10µLD1S80 。
(4)加入2µL上样缓冲液。
(5)轻弹管壁混匀，再瞬时离心，使管壁上的液滴下落。
(6)用1×%琼脂糖电泳凝胶。
(7)60V预电泳1,2min。
(8)在凝胶上选一孔加6µLDNA相对分子质量标记(DNA100bpLadder)。
(9)每人将刚刚准备好的10µLD1S80 PCR扩增产物+2 uL的上样缓冲液各自加入凝胶样孔，注意不要有气泡进入。
(10)60V电泳30,40min。
(11)取出凝胶用清水漂洗5,10min。
(12)凝胶用紫外分析仪观察，记录每个个体的DNA条带数目及其位置。
4(观察和分析D1S80多态性。
四、结果与分析
本次实验所选择的方法是D1S80指纹图谱分析的常用方法。人群中
,。从理论上讲，可能存在435种不同的等位D1S80座位的杂合率约为86
基因组合。利用D1S80座位两侧序列设计的引物(Kasai et al，1990)，通过PCR反应，很容易确定特定个体的D1S80等位基因构成，纯合体只有一条
杂合体有两条不同的DNA带。 DNA带，而
1(将小组的电泳结果拍照，附于下:
2(根据电泳结果，填写D1S80等位基因分析结果
4
DlS80 DNA指纹特征
小组成员大小/bp 长度(重复数) 杂合/纯和
小组成员A 600 29 纯和
小组成员B 500 22 纯和
小组成员C 550 25 纯和注:因为重复数为l的DIS80 PCR 产物长161bp，所以，重复数每增加一个，序列增加长度16 bp。据此可以催算:
重复数=1+(PCR产物大小,161)/16 【讨论】
，不是很清楚，原因可能是样品浓度过稀，也就是一开始刮取的口腔内壁细胞太少了，水浴时又洒了少许，以至于后来PCR也没扩增出。还有一个可能的原因就是DNA的纯度不够，带有太多的杂质，从而跑电泳时DNA被杂质阻滞，因此效果不太好。