文档介绍：工业微生物与育种学实验
Part Ⅰ实验基本操作技能
实验三微生物显微技术
实验三微生物显微技术
必做:
四大类微生物的镜下特征
简单染色
革兰氏染色
酵母菌的计数
选做:
芽孢染色
微生物大小的测量
(1)简单染色
涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检。
涂片:取两块洁净无油的载玻片,各滴一小滴生理盐水(或蒸溜水)于玻片中央,用接种环挑取少许菌苔于水滴中,混匀并涂成薄膜。
干燥、固定:将涂面朝上在酒精灯上方稍微加热,使其干燥。
染色:滴加染液1~2滴于涂片上(染液刚好覆盖涂片薄膜为宜)。吕氏碱性美蓝染色1~2min,石炭酸复红(或草酸铵结晶紫)染色约1min 。
水洗:倾去染液,用自来水从载玻片一端轻轻冲洗,直至从涂片上流下的水无色为止。
干燥:甩去玻片上的水珠自然干燥、电吹风吹干或用吸水纸吸干均可以(注意勿擦去菌体)。
镜检:涂片干后镜检。涂片必须完全干燥后才能用油镜观察。
注意:
滴生理盐水(蒸馏水)和取菌时不宜过多且涂抹要均匀,不宜过厚。
干燥、固定时切勿离火焰太近,以防高温破坏菌体形态。水洗时,不要水流直接冲洗涂面。水流不宜过急、过大,以免涂片薄膜脱落。
水洗时,不要水流直接冲洗涂面。水流不宜过急、过大,以免涂片薄膜脱落。
(2)革兰氏染色
“三区”涂片法:在玻片的左、右端各加一滴蒸馏水,用无菌接种环挑取少量枯草芽孢杆菌与左边水滴充分混合成仅有枯草芽孢杆菌的区域,并将少量菌液延伸至玻片的中央。再用无菌的接种环调取少量大肠杆菌与右边的水滴充分混合成仅有大肠杆菌的区域,并将少量的大肠杆菌液延伸到玻片中央,与枯草芽孢杆菌相混合含有两种菌的混合区,干燥、固定。
要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色;涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性。
革兰氏染色
荚膜
(3)其他染色
芽孢染色
鞭毛染色