文档介绍：实验七
实验六微生物的接种技术及分离纯化
土壤微生物的分离和培养
目的要求
实验原理
实验材料
实验步骤
实验结果
思考题
目的要求
初步掌握微生物的分离、培养和菌种的基本方法。
练习微生物接种、移植和培养的基本技术,掌握无菌操作技术。
实验原理
土壤是微生物生活的大本营,为了获得某种微生物的纯培养,一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同,而供给它适宜的培养条件,或加入某种抑制剂,淘汰其他一些不需要的微生物,再用各种方法分离、纯化该微生物,直至得到纯菌株。
稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离
实验材料
样品:新鲜土壤。
培养基:灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏一号培养基、马铃薯蔗糖培养基。
无菌水:带有玻璃珠装有45mL无菌水三角瓶、装有9mL无菌水的试管。
其它:无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、电子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴。
试剂:1万U/mL链霉素液、10%苯酚
实验步骤
稀释涂板法
稀释混合平板法(混菌法)
划线分离
微生物的培养
制平板:每组制培养皿3付。在无菌培养皿底部注明分离菌名、稀释度、组别、班级。
实验步骤1(微生物的分离—稀释涂平板法)
制备土壤稀释液:(无菌操作过程见教师示范) 1. 称取土壤5g,放入45mL无菌水的三角瓶中,振荡10min,即为稀释10-1的土壤悬液。2. 另取装有9mL无菌水试管5支,用记号笔编上10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。取已稀释成10-1的土壤液,,用无菌吸管吸取1mL土壤悬液加入10-2的无菌水的试管中,并在试管内轻轻吹吸数次,使之充分混匀,即成10-2土壤稀释液。同法依次连续稀释至10-4、10-5 、10-6土壤稀释液。
在土壤稀释过程中,需换用不同的吸管
图-1 土壤稀释液的制备和稀释液的取样