文档介绍：真菌操作常规20070307
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用75%酒精消毒病变部位后刮取脓液，窦道壁及周围尽可能深的部位，若脓肿未破，应以无菌注射器抽出脓液送检。注意寻状和数目，酵母菌可归为3类：
(Ascomycotina)：可产生子囊孢子，如酵母属、汉逊酵母属、裂殖酵母属；
(Basidiomycotina):可产生冬孢子或掷孢子，如冬孢酵母属、掷孢酵母属等；
(Derteromycotina)：尚未发现有性期，如念珠菌属、隐球菌属、红酵母属、
球拟酵母属、丝孢酵母属等。
（一）念珠菌属（Candida）的鉴定：
1. 涂片检查
革兰染色镜检可见圆形或卵圆形芽生孢子，一般为念珠菌。亦有从孢子的芽延长而成假菌丝者。有大量假菌丝存在说明念珠菌处于生长活跃状态
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。大小约3-7×3-14μm不等，单个、成堆或呈短链排列。孢子及菌丝皆为革兰阳性，呈紫色。但有时着色不均，有时少数呈革兰阴性。可报告“找到（圆形或卵圆形）真菌孢子（及假菌丝）”。
2．分离培养
沙氏平板或斜面以及中国蓝平板上有酵母样菌落长出后，采用以下方法鉴定：
① 形态学方法：
接种显色培养基（37℃培养）和玉米粉-吐温80培养基（25℃培养），根据菌落形态、显色特征和假菌丝特征鉴定菌种。其中，显色培养上生长绿色菌落为白色念珠菌，蓝色菌落为热带念珠菌，粉红干燥菌落为克柔念珠菌，紫色小菌落为光滑念珠菌。
② 生化方法：
形态学无法鉴定的菌种可使用Vitek YST鉴定卡以及API 20C生化鉴定系统鉴定。操作方法见该产品使用说明书。
（二）隐球菌属（Cryptococcus）的鉴定：
隐球菌较念珠菌少见，但由新型隐球菌引起的脑膜炎却是一种严重的疾病。该菌存
在于鸽粪、土壤、腐烂的水果中，亦见于动物和人体。主要侵犯中枢神经系统，也可以
侵及肺、骨、皮肤，甚至引起败血症。其他隐球菌也可引起严重的临床感染。
1. 镜下特征：
① 直接镜检：标本一般为脑脊液、痰或其他分泌物。镜下可见
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圆形5-12-20μm直径之厚
壁芽生孢子，一般少有假菌丝；
② 革兰染色：为革兰阳性圆形芽生真菌孢子。注意勿将其误作染料小滴。
③ 墨汁染色：如有新型隐球菌，在黑色背景下可见圆形孢子，其周围绕以透光的厚荚膜，
厚度可与菌体直径相当。菌体的大小和荚膜的宽窄在同一张片子上可有较大
不同。有时可看到出芽的孢子。注意切勿将淋巴细胞误认为新型隐球菌。
新型隐球菌在墨汁涂片中的形态可归纳为：
●圆形或卵圆形的孢子，胞壁厚，边缘清晰，用微调节观察似有双圈；
●孢子周围有透亮的厚荚膜，孢子与荚膜之间的界限和荚膜的外缘都非常整齐、清楚；
●孢子内有反光颗粒；
●有的孢子有芽生出，且芽颈甚细。
注意：任何圆形物体边缘模糊，内部无反光颗粒，外部有较窄、内外界线不清的透亮环
者，不是隐球菌。但应注意新型隐球菌以外的其他隐球菌也有荚膜。
2. 生化鉴定：
使用Vitek YST鉴定卡以及API 20C生化鉴定系统，方法见相应产品使用说明书。
隐球菌对糖无发酵能力，菌种鉴定依赖于同化试验及其他生化反应。其中尿素酶阳性，而常见念珠菌中绝大多数为阴性，仅解脂念珠菌和部分克柔念珠菌尿素酶阳性。隐球菌中仅新型隐球菌
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酚氧化酶试验阳性，其他隐球菌阴性。常见隐球菌的生化特性见表3。
（三）其他酵母菌的鉴定：
尽管临床标本中分离出的致病酵母菌主要是念珠菌属及新型隐球菌，但其他酵母
菌也可引起严重感染。如丝孢酵母属、球拟酵母属、汉逊酵母属、红酵母属、毕赤酵母属等。如标本取自正常无菌部位（如血液、胸腹水等）应根据其形态学特征或者使用Vitek YST鉴定卡鉴定到种。鉴定步骤见表1、表2及表3。

纯培养

1%Tween80玉米粉琼脂(25℃)