文档介绍:血清谷丙转氨酶活性的测定
实验题目
实验目的
掌握谷丙转氨酶活性测定的
原理和方法
血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及a一酮戊二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸
血清加基液保温后产血清谷丙转氨酶活性的测定
实验题目
实验目的
掌握谷丙转氨酶活性测定的
原理和方法
血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及a一酮戊二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸
血清加基液保温后产生丙酮酸的多少,即反应出谷丙转氨酶活性的大小。
丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在酸性溶液中显黄色,在碱性溶液中成醌型显棕红色。
实验原理
本实验是在碱性条件下,生成醌类化合物的量反应丙酮酸的量,即反应了谷丙转氨酶的活性。
本法以lml血清与基质液在37℃,
求酶活性单位的方法:
1、标准品对照法:检品与标准丙酮酸液同样处理呈色,进行比色,计算出酶活性单位。
2、标准曲线法:取含待测物的一系列标准溶液,作标准曲线,由标准曲线查得活性单位。
一、标准品对照法 取试管4支,标号,按下表加试剂:
实验操作
56℃放置5分钟。
慢慢加入(约1分钟),边加边混匀。
室温放置 30分钟,
测OD值,波长 520nm,用蒸馏水调零点。
各管混匀,放37℃水浴5分钟
慢慢加入(约1分钟),边加边混匀
,混匀
56℃放置5分钟。
室温放置 30分钟
测定OD值, 波长 520nm,用蒸馏水调零点。
一标准对照法
2、公式计算酶活性单位(要求带入数据,写出结果)
二、标准曲线法
2、绘制标准曲线,(要求规范作图)
3、通过方法一的ODA-ODB,在标准曲线中,查得酶活性单位
实验结果
注意事项
操作中加 NaOH液时,需以较慢速度加入,并且边加边摇匀加快时则a一戊酮二酸引起的发色增强。
本实验中各试剂加量都需要准确,并且要注意控制条件,保温时间要严格
本法测定SGTP正常值为40单位以下。
分析实验误差产生的原因
血清GPT活性测定的意义
实验讨论