文档介绍：实验6 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
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一、实验目的
掌握稀碱法分离酵母RNA的原理与操作过程。
了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方实验6 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
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一、实验目的
掌握稀碱法分离酵母RNA的原理与操作过程。
了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。
二、实验原理
由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验室最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被苯酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在苯酚层中，向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出。此法能较好地除去DNA和蛋白质，提取的RNA具有生物活性。
酵母细胞富含核酸，且核酸主要是RNA，%~%，而DNA含量较少，%~%。为此提取RNA多以酵母为原料。工业上制备RNA多选用低成本、适于大规模操作的稀碱法或浓盐法。这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备单核苷酸的原料，其工艺比较简单。
稀碱法是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解，然后用酸中和，。提取的RNA有不同程度的降解。浓盐法是用高浓度盐溶液处理，同时加热，以改变细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。
二、实验原理
RNA含有核糖、嘌呤碱/嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮可使RNA水解，从水解液中可用定糖，加钼酸铵沉淀（或用定磷法）和加银沉淀等方法测出上述组份的存在。（1）嘌呤碱与硝酸银作用产生白色的嘌呤银化合物沉淀。（2）地衣酚显色法：核糖核酸与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的核糖继而转变为糠醛，后者与地衣酚（3，5-二羟基甲苯）反应呈鲜绿色，该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂。（3）磷酸与钼酸铵试剂作用产生黄色的磷钼酸铵沉淀[(NH4)3PO4·12MoO3↓]。
二、实验原理
三、仪器、原料和试剂
仪器：试管；试管架；100mL氢氧化钠烧杯；（×1）、（×2）、1mL（×2）；量筒10 mL、50mL各一个；滴管；水浴锅；离心机；布氏漏斗。
原料：干酵母粉
2．RNA组分鉴定
水解RNA：~1g提取的核酸，加入10%硫酸10mL沸水浴加热10分钟制成水解液，然后进行组份鉴定。
（1）嘌呤碱：取一支试管，加入1mL水解液，加入过量浓氨水（约2mL）。然后加入1mL ，观察有无嘌呤碱银化合物沉淀。
（2）核糖：取一支试管，加入水解液1mL，。放沸水浴中10min。注意观察核糖是否变成绿色。
（3）磷酸：取一支试管，加入2mL水解液，然后加入5滴硝酸银和1mL钼酸铵溶液后，在沸水浴中加热，观察有无黄色磷钼酸铵沉淀。
五、计算
RNA提取率（%）=RNA质量（g）/干酵母粉质量（g）×100%
六、注意事项
稀碱法提取的RNA为变性RNA，可用于RNA组分鉴定及单核苷酸制备，不能作为RNA生物活性实验材料。
利用等电点控制RNA析出时，应严格控制pH。
地衣酚反应特异性较差，凡戊糖均有此反应。因此地衣酚实验不能作为RNA与DNA鉴别的依据。
七、思考题
1、如何得到高产量RNA的粗制品？
2、现有三瓶未知溶液，已知它们分别为蛋白质、糖和RNA，采用什么试剂和方法鉴定？（自行设计简便的实验）