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微生物和微生物育种实验.doc

文档介绍

文档介绍:试验1淀粉酶产生菌(细菌)的筛选
一、 目的要求:
学****掌握分离淀粉酶产生菌的方法和技术;
学****从样品中分离出所需菌株;
学****并掌握平板倾注法,了解培养淀粉酶产生菌的培养条件和培养时间。
二、 基本原理:
土壤中含有大量的微生(3)将盛有菌悬液的2平皿置 于磁力搅拌器上,一个平皿作为对照,不用紫外处理,另一平皿置于15W紫外灯下 30cm处间歇照射4min,然后用无菌水将菌液稀释10-1, 10-2, 10-3, 10-4. 10-5、 10-6, 10-7、10-88个梯度涂平板 用上述的分离培养基稀释均在红灯下 进行:每个稀释度涂平板3只,每只平板加稀释菌液0. 1ml,用无菌玻璃刮棒涂匀。
以同样操作,取未经紫外线处理的菌稀释液涂平板作对照。然后用黑布包好置于 37°C恒温培养箱中培养2d。注意、每个平皿背面要标明处理时间和稀释度。(4) 将培养2d后的平板取出进行细菌计数,根据对照平板上菌落数,计算出每毫升菌 液中的活菌数。计算出紫外线处理后的存活细胞数及其致死率。
存活率=处理后每毫升活菌数/对照每毫升活菌数*100%
致死率=(对照每毫升活菌数-处理后每毫升活菌数)/对照每毫升活菌数*100%
6、将细胞计数后的平板,分别向菌落数在5-6个左右的平板内加卢戈氏碘液数滴, 在菌落周围将出现透明圈。分别测量透明圈直径与菌落直径并计算其比值、HC
值。与对照平板进行比较,根据结果说明诱变效应。并选取HC比值大的菌落移 接到试管斜面上进行保存。
五、实验报告
将实验结果如实填入,并分别算出存活率,致死率。
实验3细菌淀粉酶产生菌的碳源谱
一、 目的要求:
学****并掌握物理诱变实验操作基本技术。
学****不同碳源对细菌淀粉酶产生菌的影响
二、 实验原理:
微生物的生长繁殖需要一定的营养物质,如碳源、氮源、无机盐、微量元素、
生长因子等,如果缺少其中一种 或不能利用其中的某一种营养物质,便不能生 长。据此,把微生物接种在基本培养基上,把待测营养物质点植于基本培养基上, 由于营养物可以在琼脂培养基中扩散,若微生物需要此种营养物质,便可生长出 菌落。未点植营养物质的其他各处,则不出现菌落。此种测定微生物营养要求的 方法称为生长谱法,生长谱法可以定性,定量地测定微生物对各种营养物质的需 要。
三、 实验材料与器材:
碳源:
10% 葡萄糖 , 10% 木糖 , 10% 麦芽糖 , 10% 蔗糖 , 10% 乳糖 ,
10%果糖1. Ogo每种碳源用9 mL蒸馅水配制 105°C灭菌20-25分钟。
器材:
培养皿(2个〕、ML移液管(2支〕、玻璃刮铲(1支〕、厌氧管(6支〕、镶子、 酒精灯、记号笔、牙签(2根)等。
试剂:
碘 1 g
碘化钾 2 g
蒸馅水 300 mL
配制时,先将碘化钾溶于5〜10 mL水中,再加入碘1 g 使其溶解后,加水至
300 mLo
四、实验步骤:
菌悬液的制备:取实验2的细菌淀粉酶产生菌,将3〜5mL无菌水倒入斜面,
洗下菌苔,摇床振荡15分钟 制成菌悬液。
每组取无菌培养皿两套,先用记号笔在平板底面划分六个区,记上欲滴加的各 种碳源的名称,皿盖注明班级、组别。然后将融化的基础培养基,倾注于无菌培 养皿中,每皿约2

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