文档介绍：试验1 淀粉酶产生菌(细菌)的筛选
一、目的要求:
学****掌握分离淀粉酶产生菌的方法和技术;
学****从样品中分离出所需菌株;
学****并掌握平板倾注法,了解培养淀粉酶产生菌的培养条件和培养时间。
基本原理:
土壤中含有大量的微生物,将土壤稀释液涂在不同类型的培养基上,在适宜的环境中培养几天,细菌或者是其他的微生物便能在平板上生长繁殖,形成菌落。将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养,因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养集中的淀粉成分来完成自身的生命活动,才能够生存。故在淀粉培养基上长出的菌便是淀粉产生菌。在培养基上滴碘液,淀粉被分解掉的部分不显现蓝色,出现透明圈,可以通过透明圈的大小来初步判断菌种产淀粉的能力。
三、材料与器材:
1、菌源:
校园土样
2、培养基(淀粉培养基):
蛋白胨 10g,NaCl 5g,牛肉膏 5g,可溶性淀粉 2g,蒸馏水 1000ml,琼脂 15~20g,121℃高压灭菌锅灭菌 20 min,待冷却至50℃左右时,于超净工作台倒摇瓶若干。
3、器材:
培养皿若干个、1ml移液管1根、刮铲 1把、锥形瓶若干个、高压灭菌锅、超净工作台、试管若干、摇床
四、实验步骤:
1、选定采土点后,铲去表土层2-3cm,取3-10cm深层土壤10g,装入灭过菌的牛皮纸袋内,封好袋口,并记录取样地点、环境及日期。土样采集后应及时分离,凡不能立即分离的样品,应保存在低温、干燥条件下,尽量减少其中菌相的变化。
2、称取土样10g,放入盛有90mL蒸馏水并带有玻璃珠的锥形瓶中,振摇约20分钟,使土样与水充分混合,将细胞分散。
3、初筛:,重复两次。后置于培养箱中培养。
检测:培养出菌落后向培养皿均匀的喷洒碘液,有明显的透明圈的菌落即为活性较高的淀粉酶产生菌。
4、复筛:选取步骤3活性较高的淀粉酶产生菌菌落移植进盛有淀粉培养基的摇瓶中,放于摇床中培养。
测定:把所有摇瓶中的菌株发酵液用琼脂平板法测定一遍(同步重复2~3块板),将其中活性圈大而清晰的菌株发酵液进一步采用精确检测法测定,选出较优良的菌株2~3株,并移植进斜面中培养
五、实验报告
简述分离操作过程的关键无菌操作技术。
将所分离的微生物平板菌落计数结果填入表中。
表平均每克样品所含微生物数
培养皿编号
每皿长出的菌落数
每克样品所含菌数
10-2
10-3
10-4
10-2
10-3
10-4
1
2
3
平均值
每克样品所含菌数=平均值×稀释倍数×10
代表性单菌落的菌落培养特征及镜检形态记录表
表含菌样品中分离菌株的特征记录
菌株编号
菌落特征
镜检形态
请设计分离筛选土壤中链霉菌的分离、纯化的实验方案(包括:采样、稀释液制备、培养基名称、培养温度、培养时间、分离纯化方法步骤等)
实验2 紫外线对细菌淀粉酶产生菌的诱变效应
一、目的要求:
1、写出完整的紫外线诱变淀粉酶产生菌的实验操作步骤;
2、写出分离培养基及其相关试剂所需的量、仪器、器皿所需的量;
3、了解紫外线诱导基本原理及方法。
二、实验原理:菌的分离与纯化:菌的紫外诱导诱变改良。
三、实验材料:
1. 培养皿、移液管、刮铲、显微镜等;