文档介绍：关于免疫细胞功能检测技术
第一张，共四十二张，创建于2022年，星期二
一淋巴细胞的功能检测
淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体外实验主要包括淋巴皮肤试验
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二、B细胞功能检测
B细胞增殖能力的试验
溶血空斑试验
B细胞抗体形成功能的检测
体内试验
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(一)B细胞增殖能力的试验
抗IgM
细菌脂多糖
SAC的SPA
B细胞增殖
形态学
3H－TdR掺入法
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(二) 溶血空斑试验
1. 原理：
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2. 方法学：
经典溶血空斑形成试验
被动溶血空斑试验
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3．临床应用与评价
溶血空斑试验主要用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响
评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力。
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(三)　 B细胞抗体形成功能的检测 ——酶联免疫斑点法ELISPOT
：
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2．应用与方法学评价：
该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。
优点：
稳定、特异、抗原用量少；
可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量；可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。
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(四)　体内试验
体内抗体产生的特异性抗原有白喉类***、破伤风类***、多价肺炎链球菌菌苗等。
将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内B细胞的功能。
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染色计数
离心取上清
测LDH或AKP
离心取沉淀
测活细胞荧光
测发光强度
测CPM值
形态法
酶释法
荧光法
同位素法
化学发光法
三、NK细胞活性测定
靶细胞溶解
常用靶细胞: K562细胞株
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二吞噬细胞功能检测技术
按其形态大小分为两类：
大吞噬细胞—单核-吞噬细胞系统
小吞噬细胞—中性粒细胞
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一、中性粒细胞功能的检测
细胞趋化功能的检测
吞噬和杀菌功能的检测
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(一) 细胞运动功能——趋化功能检测
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2. 方法：
琼脂糖平板法
滤膜渗透法（Boyden 小室法）
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(二)吞噬和杀菌功能测定
1．显微镜检查法：
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2. 溶菌法
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NBT还原试验
原理：
N-N-
C + H+
N=N-R-
N-NH2
C
N=NH
四氮唑基（淡黄色）
甲臜（紫黑色）
3．NBT还原试验
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中性粒细胞
NBT
甲臜颗粒沉积于胞质中
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二、巨噬细胞功能检测
(一)炭粒廓清试验
正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。
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(二)吞噬功能检测
巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞。
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(三)巨噬细胞溶酶体酶的测定
1．酸性磷酸酶的测定
***铅法
偶氮法
2．非特异性酯酶的测定
常用α-萘醋酸法
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(四) 细胞毒作用测定
用IFN-γ激活小鼠巨噬细胞，观察其对125I-UdR标记的DBA/2小鼠肥大细胞瘤P815的杀伤活性。
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