文档介绍：. .
优选
专业：农业资源与环境
姓名：李佳怡
学号： 3130100246
日期：碱性或中性，此时核酸分子带负电，向正极移动。
碱基组成与电泳温度的影响: 一般影响不大。
⑥质粒DNA不同构型在琼脂糖凝胶电泳中的迁移速度：
环形双链DNA分子有三种构型。
第一种是共价闭合环状DNA，它的两条链都保持完整的环状构造，通常呈超螺旋构型，迁移速度最快；
第二种是开环DNA，它的双链中的一条保持完整的环状构造，另一条单链上有一到几个切口两条核苷酸链中只有一条保持完整的环形构造，即OC构型，迁移速度最慢；
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优选
第三种是线状DNA，这种质粒的双链断裂呈线状,通称L构型。
这三种构型的同一种质粒在琼脂糖凝胶中电泳时，出现不同的迁移速率，走得最快的是超螺旋构型，其次是线性构型，最慢的是开环构型。
⑦实验有关试剂的作用：
溶液Ⅰ：葡萄糖：增加溶液的黏度，减少抽提过程中的机械剪切作用，防止破坏质粒DNA。EDTA：络合掉Mg等二价离子，防止DNA酶对质粒分子的降解作用。Tris·HCl：使溶菌液维持溶菌作用的最适pH围。
溶液Ⅱ：SDS：解聚核蛋白并与蛋白质分子结合使之变性。NaOH：破坏氢键，使DNA分子变性。
溶液Ⅲ：中和溶液Ⅱ的碱性，使染色体DNA复性而发生缠绕，并使质粒DNA复性。高盐的3mol/L NaAc/KAc有利于变性的大分子核质体DNA以及K/Na离子会与SDS形成溶解度很低的盐并与蛋白质形成沉淀而除去。
酚：一种强烈的蛋白质变性剂，能非常有效地去除蛋白质，同时抑制了核酸酶的降解作用。
***仿：有强烈的溶脂倾向，可以溶解细胞膜，同时溶解去除脂质类杂质，此外具有使蛋白质变性并分相的作用。
异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。
乙醇或异丙醇——可以沉淀核酸，当参加乙醇时，其会夺去核酸周围的水分子，使其失水而易于聚合。一般用2倍体积的乙醇或1倍体积的异丙醇沉淀DNA和RNA。
70％的乙醇——用于洗涤核酸沉淀，其目的是去除盐及挥发性较小的异丙醇。
RNaseA——用于消化质粒DNA溶液中的剩余RNA。
实验材料与试剂
1、实验材料
含重组质粒菌种
2、实验试剂
⑴ LB液体培养基 ⑵ 氨苄青霉素：100mg/ml ⑶ 溶液Ⅰ⑷ 溶液Ⅱ
⑸ 溶液Ⅲ⑹ 酚：***仿：异戊醇〔25：24：1〕 ⑺ 无水乙醇 ⑻ 70%乙醇
⑼ TE缓冲液〔pH 〕 ⑽ RNaseA〔1mg/ml〕 ⑾ ×TBE缓冲液〔〕
⑿ 琼脂糖 ⒀ 6×加样缓冲液 ⒁ 1mg/ml溴化乙锭〔EB〕
实验器材与仪器
1、恒温培养箱 37℃； 2、恒温摇床 37℃； 3、高压灭菌锅；
4、超净工作台； 5、台式离心机；