文档介绍：口腔内科论文口腔上皮细胞论文：
口腔黏膜上皮细胞体外培养的影响因素分析及改进方法
［摘 要］ 目的分析人口腔黏膜上皮细胞培养的影响因素，
并建立稳定的细胞培养体系。方法新洁尔灭和硫酸庆大霉素 联合处理口腔黏膜标本，比较不同浓度的 况并拍摄照片。
免疫细胞化学染色 取第 2 代细胞制细胞爬片，
PBS 洗涤 3 次后， 4%的多聚甲醛溶液固定 30 min，
%Trtion-100室温下处理10 min。用广谱单克隆角蛋白抗 体及SP免疫组化试剂盒按试剂盒说明书进行免疫组化染色。 以正常口腔黏膜组织石蜡切片为阳性对照， PBS 代替一抗为 阴性对照。
.5统计学分析
将各组数据输入SAS ，经Fisher确切概率 法(Fisher' s exact test)检验，。
结果
上皮分离结果
医学论文写作发表快速通道:WWW. qikaiiwang. net QQ: 987887908 在4°C下，%的Dispase对上皮的分离效果差，多例
分离结果为无分离作用，极少结果为完整分离作用；而 % 的 Dispase 分离效果较好，多例分离结果为有分离作用，有 些上皮可完整地脱离下来或用镊子轻轻一揭即可完整分离。 两种浓度 Dispase 的上皮分离作用的比较见表 1，经 Fisher 确切概率法检验， 2 种浓度的 Dispase 对人口腔黏膜上皮均有 分离作用，但两组分离率的差异无统计学意义（ P>）， %浓度组有更高的趋势；2组完整分离率的差异有统计学 意义（ ）。
表丨 两种浓度Dispasefi勺丨：哎分离作制的比较
TLib I Compjrisen of sepjrjtion efleet of Dispose
at different concent ration for orEil epithelium
Di、冲応浓度11
¥均年龄（岁）
廿离率（強
完鵜分离率（％）
II
(4/] 1)
(]/]])
()
(9/]3)>*
(7/] 3) ***
注：*P=： *|LP=
各例上皮细胞原代培养过程中均未发生微生物污染。原 代培养成功率为 %（3/24），其中 13 例有上皮分离作用 的原代培养成功率为 %（3/13）。
原代形态学观察结果 倒置相差显微镜下，胰酶消化后的上皮细胞大小不一， 形态多样，其中小圆形细胞为具有增殖能力的健康细胞。接 种后24 h，部分细胞贴附于孔底，随后细胞继续贴壁。刚贴
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壁的细胞折光性强，一般为圆形、椭圆形和三角形。随后细 胞双极或多级伸出短小伪足，胞质逐渐展开。完全伸展的细 胞呈扁平的椭圆形或多角形，胞核清晰，位于细胞中央，核 仁1〜2个。细胞一贴壁生长，就开始分裂增殖；2〜3 d后,
细胞数量明显增多，大小均一或散在个别不均一的大细胞。
培养 5 d 左右时，细胞接近汇合，如铺路石状镶嵌(图 1 )， 高倍镜下可见部分细胞间波浪状或细丝状连接，似细胞间桥 样结构。首次换液移出的细胞在换液后 20 d 左右达到 80%的
汇合，也呈铺路石状外观，但部分细胞胞浆内出现空泡，而 且伸出细长伪足的细胞数量较多。
细胞生长至 80% 〜 90%汇合时传代。传代细胞贴壁比原
m 倒置相差显微镜 X100
Fig 2 Human or Lil miLcosal epithelial cells culture in it^ l:b i nd
PLtssa^r inverted phnsc-contrasl micrascopY X]O0
医学论文写诈发表快速通道:WWW. qikaiiwang. net QQ: 98788790& 代细胞快。12〜24 h传代细胞即可贴壁伸展。第2〜3代是细
胞生长的“黄金时期”，在增殖期间细胞呈椭圆形、短梭形 或多角形，核分裂相多见，出现接触抑制现象，仍呈铺路石 状