文档介绍：河北医科大学
硕士学位论文
毛乳头细胞的分离培养与体外诱导研究
姓名:符青梅
申请学位级别:硕士
专业:人体解剖与组织胚胎学
指导教师:赵昱
20090301
毛乳头细胞的分离培养与体外诱导研究目的:毛乳头细胞在皮肤创伤修复中具有重要作用,可以作为种子细胞来源参与皮肤创伤后修复,目前利用毛乳头在毛乳头细胞的分离培养实验中,采用机械分离与酶消摘要细胞构建皮肤的研究在国内外是新领域。本研究分离培养毛乳头细胞珼,对进行体外诱导,以证明其干细胞特性,为其作为毛囊化皮肤种子细胞提供依据。化相结合的方法获取毛乳头组织,利用组织培养法培养,为下一步的体外诱导打下基础。通过对体外培养的大鼠的体外诱导分化的潜能进行研究,可以进一步了解毛乳头细胞的干细胞生物学特性,为今后皮肤组织细胞的体外诱导提供方向和方法的选择。方法:应用机械法拔取新生大鼠完整生长初期毛囊,组织块法分离和培养毛乳头细胞。日龄仔鼠须消毒处理,在体式显微镜下分离毛囊,经过离心,加入.%胶原酶孵化分钟,再将组织转移至培养瓶中,在培养液中培养,用于毛乳头细胞传代培养。将第二代细胞分组并加入悍跤嘌汉以ǔざ寥担胫患优嘌旱目瞻鬃槎哉眨嬷细胞生长曲线。贸9娴某晒怯盏挤椒ǘ訢刑逋庥盏肌=长状态良好的第橥废赴直鹨詌/的密度接种中文摘要
于孔培养板中,加入正常培养基。孵箱中培养;待细胞分别铺满瓶底的%时,换成成骨诱导培养液继续培养欤约尤胝E嘌目鬃魑6哉眨结果:的分离培养与传代培养:以胶原酶分离游离培养出来的毛乳头细胞呈圆形或椭圆形。贴壁后细胞从组织中迁出,呈放射状向四周生长,细胞多呈三角形或多角形,细胞体积较大。传代后细胞呈多角形或梭形,融合后的细胞呈明显的多层化凝集现象。经多次传代的逐渐失去凝集能力,细胞形态逐渐向梭形演变,当传至第保赴长状态逐渐变差,继续培养的细胞开始出现死亡漂浮现象。毛乳头细胞生长曲线显示细胞生长总体呈“滞缓一对数生长一平台”生长模式。经成骨诱导液培养后可见细胞表面的黑色粒状物,舛ɑ钚陨撸天后镜下可见多个黑色结节形成,结节大小不一,茜素红染色结节着红色。对照组则未见结节结论:我们将机械分离与酶消化相结合的方法,先用显微解剖分离出毛乳头组织,再根据毛囊结构特点,以胶原酶消化完整毛囊,一定时间后毛囊下端毛乳头先松散而真皮鞘未分解,此时即可将毛乳头组织拣出。此方法培养出的毛乳头细胞,无污染,贴壁迅速,优于单纯的机械分离方法。毛乳头细胞为多角形或梭形,呈明显的多层化凝集现象:细胞生长曲线显示细胞生长总体呈“滞缓一对数生长一平台长模式。形成。中文摘要
对大鼠触须部的毛乳头细胞进行体外诱导,其分化具有成骨细胞特性的细胞,证实了毛乳头细胞的横向分化能力。毛囊周期性生长的特性提示有干细胞生长的特性,本实验证实毛乳头细胞具有成骨干细胞特性。总之,毛囊细胞可作为种子细胞,不但增加了皮肤种子细胞的来源范围,也为构建含毛囊结构的皮肤提供新的思路与方法。也为皮肤缺损的修复提供了新的治疗方法。关键词:毛囊;毛乳头;干细胞;皮肤中文摘要
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研究生签名:燃导师签章:起霉锎跄殇最舶侣河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺研究生学位论文独创性声明成。本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大发表或撰写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本本学位论文在导师蛑傅夹∽的指导下,由本人独立完学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则,承担相应的法律责任。二级学院领导签章:本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经人独立撰写,文责自负。研究生签名:日
毛乳头细胞的分离培养与体外诱导研究毛乳头细胞珼是位于毛囊基底部的真皮源性细胞,它调控着毛囊生长的周期,是毛囊最重要的真皮成分。它在毛发的基部突入毛球之内,除了含有结缔组织外,还有血管神经等结构。在诱导和维持毛球部上皮细胞的生长和分化中起重要作用,可诱导毛囊的再生⋯。还分泌血管内皮细胞生长因子调节毛乳头和毛囊周围血管内皮细胞的增殖蟛。。等研究还发现,分泌干细胞生长因子,该因子对黑素细胞、上皮细胞等具有调节作用,被认为是一个区域性的干细胞生长因子库!H绾位竦米愎坏母咧柿康腄⒃谂嘌跫长期维持其功能状态是开展毛囊生物学研究的基础。但由于位置隐蔽,周围组织结构复杂,目前还没有一种比