文档介绍：专题2
微生物的培养与应用
课题1
微生物的实验室培养
㈠.微生物的类群
微生物
原核类:
真核类
非细胞类：
细菌、支原体、衣原体、放线菌、蓝藻
个体微小、结构简单
酵母菌、霉菌、食用菌
真菌：
原生生物型微生物
（三）培养基
（1）按物理状态分：
（2）按功能分：
（3）按成分分：
总结：
固体培养基
液体培养基
半固体培养基
选择培养基
鉴别培养基
天然培养基
合成培养基

不管哪种培养基，一般都含有水、无机盐、碳源和氮源等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．

血清中含有：
①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）
②多种金属离子；
③激素；
④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。
⑤各种生长因子
⑥转移蛋白
⑦不明成分
人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。
（四）无菌技术

无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。
成功地培养微生物的关键。

比较
项目
理化因素的作用强度
消灭微生物的程度
芽孢和孢子能否被消灭
消毒
较为温和
部分生活状态的微生物
不能
灭菌
强烈
全部微生物
能
①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。
②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或 80℃下煮15min。
③化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；***气消毒水源。
④紫外线消毒。
消毒的方法：

（1）日常生活经常用到的是煮沸消毒法；
（2）对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法（例如牛奶）；
（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒。
（4）实验操作者的双手使用酒精进行消毒；
（5）饮水水源用 ***气进行消毒。
消毒的方法
1、灼烧灭菌
灭菌的方法：
接种环、接种针、试管口等的灭菌
2、干热灭菌：
160-170 ℃下加热1-2h。
3、高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min.
如玻璃器皿、金属用具等的灭菌
如培养基、无菌水等的灭菌
高压蒸气灭菌的原理是（）
A．高压使细菌DNA变性
B．高压使细菌蛋白质凝固变性
C．高温烫死细菌
D．高温使细菌DNA变性
B
灭菌的方法：

1、灼烧灭菌
2、干热灭菌
3、高压蒸气灭菌
4、紫外线灭菌
如表面灭菌和空气灭菌等，所用器械是紫外灯。
关于灭菌和消毒的不正确的理解是
A．消毒和灭菌实质上是相同的 B．灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子
C．接种环用烧灼的方法灭菌 D．常用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法
A
，还有什么目的？
。如果需要，请选择合适的方法。
（1）培养细菌用的培养基与培养皿
（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管
（3）实验操作者的双手
答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
旁栏思考
二、微生物实验室培养的基本操作程序
1、器具的灭菌
2、培养基的配制
3、培养基的灭菌
4、倒平板
5、微生物接种
6、恒温箱中培养
7、菌种的保存
涂布器
接种环
接种针
（用于培养细菌）
配方：
1．计算、称量
2．溶化
3．调pH：　pH7．6　
4．过滤：这一步可以省去。
5．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
6．加塞
7．包扎
操作步骤
8．灭菌:
将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。
9．倒平板:
待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.
10．无菌检查：
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48