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实验工程：荧光分光光度法测定维生素b2的含量
【实验题目】
荧光分光光度法测定维生素b2的含量
【实验目的】
1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的根本原理。
2、了解荧光分光光度计的根本原理、结构及性能，掌握其根本操优选文档
实验工程：荧光分光光度法测定维生素b2的含量
【实验题目】
荧光分光光度法测定维生素b2的含量
【实验目的】
1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的根本原理。
2、了解荧光分光光度计的根本原理、结构及性能，掌握其根本操作。【实验原理】
HC
维生素B2(又叫核黄素，VB2)是橘黄色无臭的针状结晶。其结构式为：由于分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。维生素B2易溶于水而不溶于***等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
维生素B2溶液在430〜440nm蓝光的照耀下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm附近。维生素B2在pH=6〜7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。维生素B2在碱性溶液中经光线照耀会发生分解而转化为另一物质一一光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要操纵在酸性范围内，且在避光条件下进行。
在稀溶液中，荧光强度F与物质的浓度c有以下关系：F=2・303①I0&bc当实验条件肯定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=Kc这是荧光光语法定量分析的依据。
【主要仪器与试剂】
主要仪器：F-2500HiTachi荧光分光光度计；1cm石英皿；50mL容量瓶；5mL移液管；烧杯；胶头滴管
试剂：维生素B2标准溶液：未知液4
【实验内容及步骤】
1、系列标准溶液的制备
取维生素B2标准溶液()、、、、，各参加去离子水稀释至刻度，摇匀。标记为①②③④⑤的一系列维生素B2标准溶液。待测。
2、待测液制备
，参加去离子水稀释至刻度，摇匀。待测。
3、激发光谱和荧光发射光谱的绘制
设置入em=540nm为发射波长，在250~500nm范围内扫描标准溶液③，记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线，便得到激发光谱。从激发光谱图上找出其最大激发波长入ex。在此激发波长下，在400~600nm范围内扫描，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。从荧光发射光谱上找出其最大荧光发射波长入em。
4、标准溶液及样品的荧光测定
将激发波长固定在最大激发波长入ex，荧光发射波长固定在最大荧光发射波长处入em。扫描蒸馏水和上述5个标准液的荧光发射强度。数据记录于表1中。以溶液的荧光发射强度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，制作标准曲线。
在同样条件下测定未知溶液的荧光强度，并由标准曲线确定未知试样中维生素B2的浓度，计算待测样品溶液中的维生素B2的含量。
【数据记录与结果分析】
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