文档介绍：PCR 扩增反应的操作实验报告
实验原理:
以单链 DNA 为模板，4 种 dNTP 为底物，在模板3'末端有引物存在的情况下，用酶进行互补链的延伸，多次反复的循环能使微量的模板DNA得到极大程度的扩增。在微量离心管中，加入与待扩增PCR 扩增反应的操作实验报告
实验原理:
以单链 DNA 为模板，4 种 dNTP 为底物，在模板3'末端有引物存在的情况下，用酶进行互补链的延伸，多次反复的循环能使微量的模板DNA得到极大程度的扩增。在微量离心管中，加入与待扩增的DN***段两端已知序列分别互补的两个引物、适量的缓冲液、微量的DNA膜板、四种dNTP溶液、耐热Taq DNA聚合酶、Mg2d等。反应时先将上述溶液加热，使模板DNA在高温下变性，双链解开为单链状态；然后降低溶液温度，使合成引物在低温下与其靶序列配对，形成部分双链，称为退火；再将温度升至合适温度，在 Taq DNA 聚合酶的催化下，以dNTP为原料，引物沿5'-3'方向延伸，形成新的DN***段，该片段又可作为下一轮反应的模板，如此重复改变温度，由高温变性、低温复性和适温延伸组成一个周期，反复循环，使目的基因得以迅速扩增。因此PCR循环过程为三部分构成：模板变性、引物退火、热稳定DNA聚合酶在适当温度下催化DNA链延伸合成。
实验步骤:一、PCR反应的条件
PCR反应条件为温度、时间和循环次数。
1．温度与时间的设置
变性温度与时间：变性温度低，解链不完全是导致PCR失败的最主要原因。一般情况下，93°C〜94°C lmin足以使模板DNA变性，若低于93°C则需延长时间，但温度不能过高，因为高温环境对酶的活性有影响。此步若不能使靶基因模板或PCR产物完全变性，就会导致PCR失败。
退火(复性)温度与时间：退火温度是影响PCR特异性的较重要因素。变性后温度快速冷却至40C〜60°C，可使引物和模板发生结合。由于模板 DNA比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞。退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度。对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55C为选择最适退火温度的起点较为理想。
延伸温度与时间：Taq DNA聚合酶的生物学活性：70〜80C，150核苷酸 /S/酶分子；70C，60核苷酸/S/酶分子；55C，24核苷酸/S/酶分子；高于90C时，DNA合成几乎不能进行。
PCR反应的延伸温度一般选择在70〜75C之间，常用温度为72C，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1kb以内的DN***段，延伸时间lmin是足够的。 3〜4kb的靶序列需3〜4min；扩增10kb需延伸至1