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per扩增实验报告
篇一：DNA提取及PCR扩增实验报告
PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳刘琳1131428环境科学
一、实验目的
学****并掌握PCR扩增的基本原理与实验技术。
对扩增后的DNA进行琼脂糖凝
污染。
实验的照片显示实验结果有拖尾现象，但是并不影响后续实验。在实验
过程中由于有些试剂加到了管壁上面，
并没有完全加入，可能会出现一些精选公文范文
差。另外在第1列条带中出现了其他的亮带，可能是由于在前期的扩增实验中滴加试剂时由于量过少而进行的摇匀和融合等操作产生了非特异性扩增，也有可能是因为胶板制作过程中梳子的位置不合适或者胶板制作时边缘处不够均匀导致产生污染。但总体而言，实验结果较为满意。
六、实验注意事项
由于PCR技术非常敏感，可使一个DNA分子得以扩增，装有PCR试剂的离心管打开之前，应先在微量离心机上作瞬间离心使液体沉积于管底。PCR 扩增反应的条件，要控制好温度、时间和循环次数。
最好在加完所有其它反应成分后才加模板DNA。
配琼脂糖时应使其完全溶化后方可制胶。
具有致癌作用，配制及使用时应带一次性手套。并在专门的实验室内使用。精选公文范文
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七、实验收获
通过本次实验学****并掌握了 PCR 反应的基本原理、实验过程及技术。
通过本次实验掌握了电泳实验分离DNA的原理和方法。
八、思考题
1、如果你的研究中要扩增大肠杆菌某个酶的基因，你如何进行相关实验？
通过PCR扩增出想要的片段，然后通过凝胶电泳实验进行回收，并与合适的载体连接，转化进感受态细胞。经过培养提取质粒，进行酶切或PCR验证，测序最终验证，保存菌种
2. 一对引物序列为5 ‘-GACTCCAGTCGAATCTACCA-3'和
5 '-AACCGTGGCGACACCGCTAA 请计算它们的Tm值及选择合适的退火温度，如果按你算的退火温度做PCR时没有得到相应的产物，你怎么解决？
5 ‘ -GACTCCAGTCGAATCTACCA-3'
Tm 值=4 (G+C) +2- 精选公文范文
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=4 (3+7) +2 (6+4)-
=60°C-
=50〜55 °C
5
‘ -AACCGTGGCGACACCGCTAA'
Tm 值=4 (G+C) +2 -
=4+2 -
=64 C-=54〜59 C
因此退火温度可以选择在55C 可以通过分析几个逐步提高退火温度的反应以提高特异性。开始低于估算的Tm5C，以2°C为增量，逐步提高退火温度。较高的退火温度会减少引物二聚体和非特异性产物的形成。为获得最佳结果，两个引物应具有近似的Tm值。引物对的Tm差异如果超过5C,就会令引物在循环中使用较低的退火温度而表现出明显的错误起始。如果两个引物Tm 不同，将退火温度设定为比最低的Tm 低5C或者为了提高特异性，可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环，然后在根据较低Tm设计的退火精选公文范文 9
精选公文范文温度进行剩余的循环。这使得在较为严紧的条件下可以获得目的模板的部分拷贝。
篇二：PCR实验报告
普通生物学实验报告实验名称：用PCR扩增的方法鉴别不同物种来源的肌肉
一、特异性目的片段DNA的扩增（一）实验原理
聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）是体外酶促合成特异 DN***段的一种方法，其基本原理为 DNA的半保留复制。PCR技术由①高温变性模板；②引物与模板退火；③引物沿模板延伸这3步反应组成一个循环，通过多次循环反应，目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：将模板DNA置于高温下（通常为93°C-94°C）,使其变性解成单链；人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因的两条单链互补结合；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）在72C将单核苷酸从引物精选公文范文 10
精选公文范文的3'端开始掺入，以目的基因为模板按 5' f 3'的方向延伸，合成互补链。
本实验采用物种特异性引物扩增的方法来鉴定3种不同物种来源的肌肉。以不同物种来源的动物DNA为模板，用物种特异性的引物进行PCR扩增，只有在模板和引物的物种相对应的情况下才会有特异性条带的出现。应用此方法，可以特异性地检测样品中痕量的特定 DNA成分。
（二）实验步骤
不同反应体系的配制
按下表将各成分分别加入一做好标记的无菌PCR管中，配制50卩1的PCR 反应体系，注意酶要最后加，加完后将 PCR管放置在冰上。
将上述混合液稍加离心，约10s 左右。取下后立即置于PCR仪中