文档介绍：核酸检测基本知识
1•什么是核酸检测
核酸的定义:核酸是由核苷酸或脱氧核苷酸通过3,,
5!-磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子。
核酸具有非常重要的生物功能,主要是贮存遗传信息和传递遗传信息。

核酸大分子可分为
核酸检测基本知识
1•什么是核酸检测
核酸的定义:核酸是由核苷酸或脱氧核苷酸通过3,,
5!-磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子。
核酸具有非常重要的生物功能,主要是贮存遗传信息和传递遗传信息。

核酸大分子可分为两类:脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。
HydrogenExjixJ
sugar
PlhCHphalegroup
DNA
(doub^-slrjnded}
3。核酸的组成
Ribose■虫 SNA
Sugar Base
"PhcKph&diestier
■linkage
Phasphialei
sgrovp
RNA
DNA和RNA都是由一个一个核苷酸(nucleotide)头尾相连而形成的,由C、H、0、N、P,5种元素组成。DNA是绝大多数生物的遗传物质,RNA是少数不含DNA的病毒(如HIV病毒,流感病毒,SARS病毒等)的遗传物质。RNA平均长度大约为2000个核苷酸,而人的
DNA却是很长的,约有3X10V个核苷酸。

在蛋白质的复制和合成中起着储存和传递遗传信息的作用。核酸不仅是基本的遗传物质,而且在蛋白质的生物合成上也占重要位置,因而在生长、遗传、变异等一系列重大生命现象中起决定性的作用。
DNA与RNA都是核酸,它们在化学组成上有什么区别如
下:
DNA与RNA的比较
DNA
RNA
主要存在部位
细胞核
细胞质
基本组成单位
脫氧核苷酸
核糖核苷酸
碱基种类
A、G、C、T
A、G、C、U
五碳糖种类
脱氧核糖
核糖
核苷酸链
两条脫氧核苷酸链
一条核糖核苷酸链
5。检测方法
核酸检测方法,主要通过同时进行靶核酸扩增和可检
、血液筛选、遗传病诊断和预防、法医学等领域的核酸检测。
目前主要使用的方法有以下几种:
a。核酸序列依赖性扩增法
NASBA是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异性核苷酸序列等温扩增RNA的新技术。反应在421进行,可在2h内将RNA
模板扩增约109倍。NASBA原理是提取病毒RNA,加入AMV逆转录酶、RNA酶H、T7RNA聚合酶和引物进行扩增。整个反应分非循环相和循环相:在非循环相中,引物I与模板RNA退火后在AMV逆转录酶的作用下合成cDNA,形成RNA:DNA杂合体,随即RNaseH降解RNA,引物II与cDNA退火,在反转录酶作用下合成第2条DNA互补链。双链DNA可在T7RNA聚合酶的作用下,经其启动子序列起动而转录RNA,RNA又可在反转录酶的作用下反转录成DNA,进入循环相,对模板进行大量扩增。
b。转录介导的扩增技术
TMA技术原理与NASBA基本一致,略有不同之处是TMA利用的是MMLV逆转录酶及T7RNA聚合酶两种酶,MMLV逆转录酶既有逆转录酶的活性又具有RNA酶H活性。反应在41。51进行,可在1h内将RNA模板扩增约109倍。
c。