文档介绍：培养单位:中国削睇黼尔滨兽医研究所中国农业科学院肖又■广亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备与血凝素基因的体外高效表达和纯化硕士研究生:崔佳莹指师:邓国华申请学位类别:农学硕士研究方向:禽流感分子生物学提交日期密级:论文编号:∑一’—了产
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锄‘\\彦惨乏/居南堋曾显营诱星当留荔机中国农业科学院硕士学位论文评阅人、’●
导师签名:澎换宋研究生签名:雇售彦席俘睦独创性:声明关于论文使用授权的声明沙,/年占月一日时间。乙,//年∥尼咖年涫盌本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名:时间:本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,.允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。
摘要和疌/疭/为免疫原免疫芍蹷痗鼠,三次免疫并抗亚类鉴定表明,和为啵溆辔狪啵崃淳猯础>D关键词:,单克隆抗体,蛋白表达及昵┐炕汗瞬阄本研究以近年禽流感监测分离的亚型禽流感病毒毒株疌/疭/加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,以两株病毒全病毒作为包被抗原进行检测、并进行血凝抑制试验检测筛选,阳性细胞经有限稀释法并进行间接的觳馍选,通过蔚难强寺』竦昧株杂交瘤细胞,均可以稳定地分泌抗的抗体,依次命名为、、、、、。对亚型特异性单制检测,特异性六株杂交瘤细胞可以和绝大部分禽流感病毒毒株结合,具有较好的广谱性和稳定性。染色体数值符合脾细胞与骨髓瘤细胞的染色体数目之和。六株杂交瘤细胞的效价依次。血凝试验结果表明所制备杂交瘤细胞与禽流感病毒其他亚型及新城疫病毒无交叉反应。经冻存复苏后,仍具有较高的抗体水平,所获杂交瘤细胞均与感染了相应亚型⑸匾煨越岷希痘裼ü獗昙堑亩梗谟ü庀晕⒕迪路⒊雒髁恋穆色荧光。特异性的禽流感亚型的抗的单克隆抗体的成功制各,为募嗖狻⒄锒霞凹诊断提供良好的物质基础,为研究病毒抗原结构与功能提供物质手段。根据株基因组序列,设计合成特异性铮ü9鍼方法扩增禽流感亚型的基因,克隆得到的基因,定点插入到转移载体谐晒菇ㄖ刈榈淖R圃靥澹构建好的重组转移载体转座感受态,进而获得重组的转座子,通过转染昆虫细胞获得重组的杆状病毒,大量增殖悬浮培养获得表达蛋白,对蛋白进行常规的电泳转印及定,同时做免疫荧光鉴定,鉴定阳性的蛋白用纯化带昵┑鞍椎姆椒ń写炕⒔ù炕的蛋白经过凝胶过滤层析分离低聚物和三聚体,获得浓度较高并具有血凝活性的三聚体蛋白,为亚型流感病毒可能抗原结构位点的预测和定位提供基础。为:、
疌/,琣,甋、,,,,琣,/,,,,.—.瓵,.,琣,:珿甌,瑃
目录英文缩略表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..第一章绪论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.禽流感的概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯高致病性禽流感的爆发及其公共卫生意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯咧虏⌒郧萘鞲械姆肿由镅匦浴珹纳镅匦浴结构和功能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.裂解与流感病毒的致病性的关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.高致病性禽流感诊断及防制⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..本研究的目的与意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第二章针对流感病毒血凝素蛋白单抗的制备及鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.《局辍⑾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..∈⊙】固宓募ā结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..ü馐笛榻峁讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..庖咴难≡窦靶