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淼蒿;兹牙翮虢彰⋯⋯:物专子论文作者签名:枷舌平厶咿终眵踟龇甜日期:∞耗晟辉日日坩喝鏻暌讅日:暾荚日彰日期:加年白:口、年:口一年:海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明学位论文版权使用授权说明原创性声明高校学位论文全文数钷库”中全文发布,并可按”章稗”中规定享受相犬权黼。回童途塞握塞所节交的学位论文,是本人在导师的指导。卜.,独立进行研究鹤魉〉玫某果。除文中已经注明引川的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰弓过的作晶或成果。对本文的研究做山重要贡献的个人利集体,均已往文中以明确方式标明。、保存、使刖学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采川影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。,知识产权门属海南人学。本人已经认真阅读“咝!QШ温畚娜ò菘夥⒉颊鲁獭埃琹州意将奉人的学位论文提交本人郑重卢明:本人承担。关部疛或机构送交论文的复印琁:和电子舨,允许论文被布阅和借阅。本人授权海南人学可以将本学保密论文在解密斤遵守此规定。年仉师期导日“:
⒉酖门铀、肌,藕天然橡胶是在橡胶树的乳管内合成,以胶乳楣芟赴南赴的形式贮存,是一种重要的次生代谢产物。天然橡胶的基本化学单元是顺垡煳於峭ü滋焖琈揪恫疤逡煳煜┗姿在一系列酶的作用下合成天然橡胶。目前国内外的研究主要集中在对合成途径中关键酶的分离纯化、酶特性分析、基因的同源克隆及表达等方面,而天然橡胶生物合成调节的分子机制仍然不清楚。.蛋白在调控植物基础代谢中处于中心地位,通过与代谢相关的酶或蛋白等的相互作用来调控糖、氨基酸、核酸和蛋白质等物质的生物合成;.蛋白还通过与转录因子和其他信号分子结合参与调控植物细胞信号转导。橡胶树的乳管是一种特化的组织,乳管中的—蛋白的作用目前还不清楚,本研究通过酵母双杂交技术筛选与鉴定了橡胶树乳管中与—蛋白相互作用的蛋白,为进一步研究—蛋白在橡胶树乳管中的功能和天然橡胶生物合成调节的分子机制打下了基础。的酵母双杂交诱饵载体。诱饵载体自激活检测表明三个诱饵载体无自激活性:毒性检验表明诱饵载体表达蛋白质对酵母菌无毒害作用。诱饵载体可以用于酵母双杂交实验。构建了巴谣橡胶树胶乳酵母双杂交文库。成功转化单菌落个数为;浓缩后每毫升菌悬液中含有细胞数为晃目獾味任.。诱饵载体与文库杂交,通过营养缺陷筛选、单独与诱饵载体共转验证,共得到个阳性克隆。经分析,这些编码蛋白按功能分成胶乳代谢、氧化应激、蛋白/疪结合蛋白、信号蛋白、碳水化合物代谢、蛋白酶体相关蛋白、未知蛋白七大类。实验数据分析表明赡芡ü胱B家蜃親的相互作用来调控天然橡胶的生物合成,可能通过与橡胶小粒子蛋白的直接作用参与天然橡胶的生物合成的调控。关键词:巴西橡胶树,.蛋白,酵母双杂交,蛋白质相互作用琁琁
.,瑃..,瑆,,’甆···琯,.,/琣.·,.瑆.,.篐,—,—
.⋯...................................................⋯...................⋯................天然橡胶生物合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..蛋白的距细胞定位⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.蛋白在植物中的作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.研究蛋白质问相互作用的技术⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.酵母双杂交技术的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯酵母双杂交系统的组成及操作过程⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。酵母双杂交系统的优缺点⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一酵母双杂交技术的发展和衍生⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.酵母双杂交技术的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一本研究的目的和意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯本研究总的技术路线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯牧嫌敕椒ā材料与试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.<⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯基因的扩增⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.锏幕厥铡目的片断与甌连接及其重组子的筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.蛋白基因的诱饵载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.用盖形坏愕囊锷杓朴牒铣伞酵母双杂交诱饵载体的检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..