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戊微丹论文作者签名:’害二茛一再海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明日期:,甓嘣聄日学位论文版权使用授权说明日期:如,甓嘣翵日年聄日握銮厘澄厦:旦兰生￡旦稀甑┤堋本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人论文作者签名:本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果保密论文在解密后遵守此规定。本人已经认真阅读“咝Q宦畚娜氖菘“咝Q宦畚娜氖菘狻敝腥姆⒉迹⒖砂段保存和承担。日期:
摘要结核病是~个世界性的健康问题,每年约有虻娜怂烙谡庵旨膊 U庵挚煽的传染性疾病在近些年又有卷土重来的趋势,主要与艾滋病感染增加与耐多药结核病的增多有关。因此,结核病快速准确的早期诊断成为控制结核病流行的重要手段之一。本实验研究目的是通过构建结核茵蛋白表达载体,在大肠杆菌薪杏盏急泶铮⒍员泶锊锝写炕曰竦么罅緾一抗原、抗原,同时对其免疫反应性进行鉴定评价,为探索重组多肽在结核病血清学诊断的应用奠定前期实验基础。根据结核菌编码、亩蔚幕蛐蛄校ü齈物设计软件,分析设计了特异引物,通过际醮咏岷朔种Ω司鶫基因组┰出、鞍谆蚱危康钠慰寺〉皆吮泶镌靥錚一校晒建舜—娜诤媳泶镌靥濉@没ё;ń刈楸泶镌靥遄;奖泶锼主菌校琍检测获得阳性的工程菌株;经诱导表达和狿析,本实验成功获得了能够表达目的重组蛋白的工程菌。经梯度实验确定了工程菌发酵最适温度为℃,诱导后,可达到最大表达量。重组蛋白与重组蛋白最适诱导浓度分别为疞、/1泶锓绞椒治龇⑾种刈榈鞍自诖肠杆菌中主要以可溶性蛋白形式存在,并利用亲和层析法对重组蛋白进行了纯化。血清学诊断是结核病早期、快速诊断方法中的~种,联合使用重组纯化的特异性蛋白抗原可以改善这种方法检测结核病人的敏感性和特异性。本研究还将重组的蛋白组成联合抗原进行笛椋峁允炯觳饨岷瞬∪】笛偬逭叨哉昭G逄匾煨晕%,表明联合抗原具有用于结核病的免疫学诊断试剂的价值。关键词:结核分枝杆菌表达鞍
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录目僦鞍住摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第一部分前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·岷瞬×餍邢肿锤攀觥し澜岷瞬⊙芯拷埂璴结核病感染免疫机制研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.』朴朊庖摺结核病疫苗现状及展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结核病实验室诊断方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·早期分泌性蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一培养滤液蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯狙芯磕康暮鸵庖濉笛榱鞒掏肌第二部分结核分枝杆菌蛋白表达载体构建、表达与纯化⋯⋯一牧嫌敕椒ā实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·.旰椭柿!.⑹约痢⒒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ぁ·ぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁ
.饕R瞧鳌笛榉椒ā编码基因引物设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结核菌奶崛结核菌肽段编码基因的克隆⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯┰鯟.、鞍谆颉锏幕厥铡克隆载体的构建及鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“;⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·.承阅┒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.;凹ā的构建与筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.柿5闹票浮惺苣钕赴闹票讣白;秆⊙粜钥寺蛋白编码基因的诱导表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯