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狫日期:≯晗缭赂空抽论文作者签名:乏日期:功,,年多月卵学位论文版权使用授权说明握銮厘澄卮:旦竺生生￡旦三笙筮查。本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果,知保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名:本人已经认真阅读“咝Q宦畚娜氖菘夥⒉颊鲁獭保饨ū救说难宦畚奶峤“咝Q宦畚娜氖菘狻敝腥姆⒉迹⒖砂
和控迫切的要求。近年来,血清学诊断的方法越来越多的应用在了结核病的早期实验室诊断中,取得了不错的成绩,但是也存在着诸多问题。其中一个核心问题就是至今没有找到一个稳定且高效的特异性抗原,或抗原组合。所以,寻找敏感性及特异性都令人满意的抗原及抗原组合成为结核病血清学诊断的研究热点。本实验涉及到的的两种抗原为结核分枝杆菌与卡介苗幕虿钜烨牧街旨想蛋白,通过基因工程的方法直接表达出两种抗原,并且进行血清学诊断效果分析,第一可以简化操作,第二可以找到无法在结核分枝杆菌培养滤液中纯化得到的蛋白。,在大肠杆菌薪杏盏急泶铮⒍员泶锊锝写炕曰竦么罅恐刈榭乖倍重组多肽免疫反应性进行鉴定评价,为探索重组多肽在结核病血清学诊断的应用奠定前期实验基础。ü齈引物设计软件,分析设计特异引物,通过际醮咏岷司鶫基因组┰龀瞿勘抗原的基因片段,将目的片段克隆到原核表达载体校晒菇∟端带有组氨酸标签的表达载体。利用化学转化法将重组表达载体转化甤曛校通过秆』,本试验成功获得了能够表达目的重组抗原的工程菌株。经梯度实验确定了工程菌发酵最适温度为℃,诱导后,可达到最大表达量,诱导剂最适诱导浓度为/1泶方式分析发现该重组多肽在大肠杆菌中主要以可溶性蛋白的形式存在,并利用亲和层析联合使用重组纯化的特异性蛋白抗原可以改善血清学诊断方法检测结核病人的敏感性和特异性。,∪搜G蹇菇岷丝固宓拿舾行晕%,检测健康查体者对照血清特异性为%,.乖觳饨岷瞬∪】挡樘逭叨哉昭G逄匾煨晕%,两科·%表明联合抗原可用于结核病的免疫学诊断试剂的丌发。关键词:结核分枝杆菌血清学诊断特异性抗原原核表达方法对重组抗原进行了纯化。
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部分结核分枝杆菌与蛋白表达载体构建、表达与纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.旰椭柿!.⑹约痢⒒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.常用试剂及缓冲液配方⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.隩基因特异性引物设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯┰⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯锏幕厥铡克隆载体的构建及鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯;⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.承阅┒薚/.嗦牖虻闹票浮