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别噬轹夺\删、㈣论文作者签名:糙时间∽,/年加研究生签名:现乙蓝作独创性声明关于论文使用授权的声明侮们【保密的学位论文在解密后应遵守此协调如本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。月时对问
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本论文研究得到共同资助奶牛产业技术体系项目嗪牛簄转基因重大专项嗪牛
摘要乳腺上皮细胞由于其特有的合成和分泌的生理功能,而成为研究乳腺生物反应器的重要细胞模型。这种细胞模型能真实反映动物乳腺组织生长、发育及泌乳的启动、维持等各项生物学机制,验证构建的乳腺特异性表达载体构建的是否合理有效。乳腺上皮细胞及以此为基础建立的细胞模型,其应用涉及到分子生物学、内分泌学、发育生物学、细胞生物学、生物化学等多个领域,对于研究不同乳蛋白基因的表达及乳腺生物反应器有重要意义。人体内,∞多不饱和脂肪酸与嗖槐ズ椭舅岬谋壤ɑ嶂苯佑跋焐硖褰】导澳承┞性病的发生。嗖槐ズ椭舅峥梢跃墒澄镏苯踊袢。部梢杂扇颂搴铣伞5ú溉槎锾迥缺乏合成‘多不饱和脂肪酸的酶,所以,正常状态下,∞荒芫梢郴袢 6谙代饮食结构中,‘一谋壤现仄ǜ撸苯佑跋炝讼执说纳硖褰】怠T谡庵智榭鱿拢人们需要丰富的∞一嗖槐ズ椭舅岬睦丛矗佣档虲一抟谋壤纳迫嗣堑纳攀结构。基因恰好可以编码‘槐ズ椭舅嵬亚饷福迪諨一嗖槐ズ椭舅岬絜多不饱和脂肪酸的转变。本研究所用实验材料来源于屠宰场屠杀的健康泌乳后期的荷斯坦奶牛的乳腺组织,通过对荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞培养方法的筛选,建立了具有正常生理功能的奶牛乳腺上皮细胞系,并通过对乳腺上皮细胞的特异性蛋白角蛋白的免疫荧光染色,对所建立的乳腺上皮细胞进行了鉴定。结果:利用组织块接种法获得里大量的乳腺上皮细胞用于原代培养。以为基础培养液,在其中添加%的胎牛血清、胰岛素氢化可的松痬,乳腺上皮细胞生长状态良好。乳腺上皮细胞与成纤维细胞混合生长,原代培养中,两种不同细胞之间界限明显,但经过传代后,界限不明显。乳腺上皮细胞有不同的细胞形态,多为鹅卵石样及多角形。利用本实验室己构建的两个乳腺特异性表达载体蚿及两个对照组载体,转染所建立的乳腺上皮细胞系,获得了转猯基因的乳腺上皮细胞。通过ǎっ髂康幕騭蛞颜先胂赴蜃槟凇关键词:奶牛乳腺上皮细胞,体外培养,乳腺生物反应器,基因痬、转铁蛋白痬、孕酮痬、.
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摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第一章文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯乳腺上皮细胞培养研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..乳腺上皮细胞培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯乳腺上皮细胞的冻存与复苏⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯乳腺上皮细胞的生物学性状检测⋯⋯