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生物化学与生物物理进展...
分子生物学在蛋白质结晶中的应用术
袁彩刘钐黄明东”
中国科学院福建物质结构研究所,福州
,蛋白质
自身是结晶时最重要的变量,可以说,蛋白质的内在特性在某种程度上决定了其能否结晶以及所得晶体分辨率的
、均一性及可结晶性等内在特性,
促进蛋白质的结晶,成为提高蛋白质结晶能力和蛋白质晶体分辨率的有效途径.
关键词蛋白质工程,蛋白质结晶,溶解度,均一性,可结晶性
学科分类号
蛋白质射线结晶学中,
长和结构解析即所谓的相角问题都是困难的步达系统在表达需分子伴侣辅助折叠或需翻译后修饰
,由于计算技术的快速进步、
光源的广泛应用以及射线结晶学研究方法如反表达系统蛋白质表达水平高、生产成本低,但它们
常散射法的发展和进步,相角问题的解决和结构的加工修饰体系与哺乳动物细胞不完全相同,哺乳
,但其
之下,蛋白质结晶则成为结构测定、乃至结构基因表达量低、
组学发展的主要瓶颈,而获得足够量高纯度的和适些结合硒代甲硫氨酸、同位素标记、有毒性的蛋白
于结晶的蛋白质则是蛋白质晶体结构测定的前提. 质或膜蛋白【.载体上的一些改造,也使大量蛋白
上世纪年代以来, 克隆、
蛋白质工程为生产大量的目的蛋白和对蛋白质进行白质纯化更为容易、融合标签如的加入使
改造提供了强有力的工具,近年来这些技术在改进外源蛋白更稳定,超级感受态细胞得到高转化效
蛋白质的可结晶性方面得到了越来越广泛的应用, 率,、等通用克隆系统的应用可将
是蛋白质结晶学的一个重要发展方向,
者的工作对此做一介绍. 对不同蛋白质基因进行克隆、获得大量的蛋白质更
为容易.
基因工程与用于晶体生长的蛋白质表达
蛋白质工程与蛋白质结晶
外源蛋白表达系统有原核表达系统、真核表达

——大肠杆菌需的活性,还要稳定、均一、
系统,由于其可有效又经济地大量表达蛋白质,经的结晶特性存在很大差异,有些蛋白质很容易长出
常成为许多科研人员表达异源蛋白的首选目标,但晶体,而对另外一些蛋白质来说,尽管费尽周折,
其不适合表达那些需翻译后修饰才有活性或有多个还是无法得到适于进行射线衍射分析的晶体,
二硫键的蛋白质, 同时大肠杆菌表达还存在真核蛋改变蛋白质的内在特性则成为解决这一问题的有效

如增强胞浆内二硫键形成的菌株、增强带中国科学院百人计划项目,福建省青年创新基金项目
大肠杆菌稀有密码子真核蛋白表达的宿主资助项目和中国科学院福建物质结构研