文档介绍：细胞学技术
显微镜
显微镜是用来观察、记录和研究经过制片技术处理后被检物体细微结构的最主要的光
学精密仪器。它广泛地应用于各学科领域中,对微观世界的探索及理论的研究起着极其重
要的作用。
显微镜的种类繁多,不仅因制造年代和不同国家的产品有不同类型,而且在结构、造型
及功能等方面亦各异。一般来说,根据照明光源的性质可分为“光学显微镜”和“非光学显微
镜”。光学显微镜是利用人眼可见的可见光或紫外线作光源,它分为单式显微镜和复式显微
镜。其中单式显微镜制造简单,放大率及性能均不高,它是由一块或几块透镜组成,如放大
镜、平台解剖镜;而复式显微镜则是由多组透镜组合而成,并可根据结构、原理和应用范围的
不同分多种类型,如常规普通复式显微镜、专用或多用特种显微镜(荧光和倒置显微镜)及大
型多用途的万能显微镜。非光学显微镜不是利用人眼可见的可见光或紫外线作为光源,而
是利用电子束作为光源,并且是以“电磁透镜”作透镜,因而也称电子显微镜。
光学显微镜
光学显微镜( )简称显微镜或光镜,是利用光线照明使微小物体形成放大
影像的仪器。目前使用最广泛的是普通光学显微镜,此外还有相差显微镜、暗视野显微镜、
荧光显微镜和倒置显微镜等。
普通光学显微镜
实验目的了解普通光学显微镜的结构、性能及维护方法,熟练掌握其使用方法。
实验原理普通光学显微镜的基本工作原理是利用物镜和目镜的多组凸透镜将物
像逐级放大并反射到视网膜上的过程。而显微镜性能和质量的高低可通过分辨率、数值孔
径、放大率及焦点深度、视场直径等指标来反映。
分辨率( )即显微镜的分辨本领,是指显微镜或人眼在和明视距离
(能看清物像的最佳标准距离)处所能清楚分辨被检物体最小间隔的能力。它主要由物镜的
分辨率所决定而与目镜无关。计算公式如下:
其中为照明光源的波长,如白光为介质的折射率,如空气玻璃
,香柏油,石蜡油为镜口角,它是指在工作距离处位于物镜光轴上标本
中的一个点所发出的光线到物镜的前透镜有效直径两端所形成的夹角。可见通过降低波
长、增大介质折射率和加大镜口角及增加明暗反差是提高分辨率的有效手段。
数值孔径( )也称镜口率,是直接决定显微镜分辨率的一个重要参
数,其公式为: ,其中镜口率数字越大,表示分辨力越高。
放大率( )即放大倍数,是光镜性能的另一重要参数。它主要有
和四种,其中和为低倍镜, 为高倍镜, 为油镜。另外,镜
头长度随倍数的增加依次增长,而在不同放大倍数的物镜筒上还标有不同颜色的环, 用于
区别。
低倍镜、高倍镜以空气为介质,而油镜需以香柏油或石蜡油为介质。这样就避免了由于
油镜镜孔小,而使进入物镜的光线产生折射,从而导致视野暗淡,物像不清现象的发生。一
台显微镜的总放大倍数等于目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积,如目镜,物镜为
,其放大倍数为倍。常用显微镜的最大放大倍数为。物镜和目镜
的放大倍数可用下列公式计算:
镜筒长度( 明视距离
物镜放大倍数目镜放大倍数
物镜焦距目镜焦距
焦点深度( )即当显微镜对标本的某一点或平面聚焦时,焦点平面上下影像清
晰的距离或范围。一般来说,焦点深度增大可看到被检物体的全层;反之,则只能看到被检
物体的一薄层。公式为:
其中, 介质折射率, 总放大率, 数值孔径。
视场直径( 也称视场宽度或视场范围,是指在显微镜下看到的圆形视场内
所能容纳被检物体的实际范围,其中视场直径愈大,愈便于观察。
实验准备
材料洋葱、人口腔上皮细胞。
仪器和器材普通光学显微镜、载玻片、盖玻片、牙签、吸水纸、眼科镊、眼科剪。
)试剂二甲苯、碘液。
实验内容
显微镜的结构显微镜( )的主要结构由三部分组成:机械部分、照明部分
和光学部分,见图
①机械部分它是显微镜的支架结构,主要包括镜座、镜柱、镜臂、镜筒、物镜转换器、
载物台和调节器。
镜座( )它是显微镜的基座,用以支持整个镜体的平稳。它常呈马蹄铁形、圆形
或方形,有的显微镜在镜座内装有照明光源。
图普通光学显微镜结构
镜柱( 它是镜座向上直立的短柱,它常与镜座和镜臂相连,也具有支持作用。
镜臂)它是与镜柱相连的结构,适于手握。有的显微镜(如型)的镜柱
和镜臂合起来统称为主体。
镜筒( )它是附在镜臂前方的筒状结构,由金属制成,其上端装有目镜,下端装
有物镜转换器。目前可根据镜筒数目,将光镜分为单筒式和双筒式两种。
物镜转换器( )它常装在镜筒的下端,呈圆盘状,分上下两片。上
片固定在镜筒下端,其正后方有一固定卡;下片可自由转动,并且有个螺旋孔,用以安
装不同倍数的物镜。螺旋孔外缘处各有一个缺刻,当转换