文档介绍：学位⋯糍引鹅儿影强学位论文作者雠中:移女签字日期:刈¨肘妙日导师签名中:毒黟豹学位论文独创性声明学位论文版权使用授权书硼年鲁橙其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得直昌太堂或其他教育本学位论文作者完全了解直昌太堂有关保留、使用学位论文的规定,有权阅。本人授权直昌太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行舛嘣拢瑈本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含机构的学位或证书而使用过的材料。与我~同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊馀贪电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表,并通过网络向社会公众提供信息服务。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ签字日期:芷·一
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摘要粲谧幽揖僬婢茉诮瞎愕膒段谏妫⒛芤云咸烟牵亲环素珻是一类广泛存在于各种具细胞结构的生物体内且结构高度保守的蛋白家族。它们是一种分子伴侣,类属肽脯氨酰顺反异构酶超家族,能催化含脯氨酸亚氨基肽键异构化,协助蛋白质正确折叠、组装和运输。此外,亲环素还与环孢素岷喜斡攵曰宓拿庖咭种疲⒃谙赴蛲觥氧化应激、胆固醇代谢等生命活动中发挥的重要的作用。解脂耶氏酵母脂肪酸和烃类等常见而廉价的物质作为代谢底物,是一种重要的工业酵母菌。解脂耶氏酵母是非致病菌,因此能用于食品和药物生产。此外,由于解脂耶氏酵母代谢分泌大量的有机酸和蛋白质到胞外培养基,所以也被人们开发成为一种优良的酵母表达系统。迄今发现并克隆的亲环素家族成员已经超过一百多种,研究者也从解脂耶氏酵母基因组中找到了种亲环素基因。本文以解脂耶氏酵母亲环素基因:为研究对象,以解脂耶氏酵母总D0澹琍扩增该亲环素基因;产物经克隆后进行测序鉴定;构建亲环素原核表达载体.;蟪Ω司;阳性克隆经诱导表达亲环素,经埘金属螯合亲和层析纯化亲环素,纯化效果通过甈缬窘屑煅椤O纸ń峁〗崛缦拢测序结果证实成功扩增得到全长解脂耶氏酵母亲环素基因。菌落煅橹な党晒菇ㄔ吮泶镏柿甈峁な担晒υ诖蟪Ω司杏盏急泶锍銮谆匪亍以上结果表明,本研究成功克隆出解脂耶氏酵母亲环素基因,并能在原核细胞中正确表达,为进一步研究解脂耶氏酵母亲环素的结构和功能奠定了基础。关键词:亲环素;解脂耶氏酵母;基因克隆;原核表达摘要·
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目录第一章前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯亲环素家族⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·亲环素的分子结构⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”亲环素的分布与亚细胞定位⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯亲环素生物活性的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·..ü檀即弧《⒂本研究的目的与意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第二章实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。主要的仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯主要的试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯菌株及其培养基⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯主要溶液和缓冲液配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.怂崽崛±⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.疘’甀。⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯儿
引物和质粒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.靥逯柿!.笛橐铩第三章实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.实验技术路线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯亲环素基因克隆载体构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”.蜃镈的电泳检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”俄⋯⋯⋯.ǘ炔舛ā┰⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··.寺≡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯