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浙江农业大学学报:~,

根癌农杆菌介导转化抗虫基因获得转基因烟草
、, 葆
傅向东毛碧增
衡江农业大学生物技术研究所,抗州,
摘要将抗虫基因构建到质粒的—上,利用农杆菌介导转化
,再生植
株的转化率为. .
关键词根癌农杆菌;烟草基因;转基因植株
中图分类磊一一一
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农作物因多种害虫的危害,给生产上造构建的植物表达载体,转化烟草,获得转
,转基因烟草的分子生物学分析得
污染而且害虫易产生抗性,因而抗虫基因工出,基因已整合到转基因烟草的基因组
.
白酶抑制荆是天然贮藏蛋白,具抗虫谱
广、对人无副作用及害虫不易产生抗性等优材料与方法
点⋯.豇豆丝氨酸蛋白酶抑制剂基因,已获得
几种抗虫的转基因植株】.我们在克隆蛋白. 植物材料
酶抑制剂基固的基础上,利用适将烟草.
于水稻农杆菌介导转化的质粒种子经酒精,.
表面灭菌后,用不舍激素培养基诱
收稿日期:
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浙江农业大学学报卷
传转化的起始材料. 的不含激素上生根培养,生根后的植
. 植物表达载体的构建株移入温室栽培.

后,
,徒
惠赠,用及酶切下含基目的手切片后用在染色,
片段,电泳回收,与上述处理载体片段连接, 观察叶片是否染成蓝色,并在显傲镜下观察.
通过菌落原位杂交和质粒酶切鉴定重组子, .分析
构建成植物表达载体图. ,提取植

切质粒产生的片段,此片段为

针用公司的“”进
囝表达藏体质粒圉
行标记,℃预杂交,杂交,洗

毗鞋膜,一℃压片曝光.
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:屺∞结果
,出“瞬
卫—
. 烟草转基因再生
ⅡⅢ.
经侵染过农杆菌的烟草叶片,在
. 农杆菌的转化././的培养基上,
采用冻融法向农杆菌中转化士共培养~
。。.的霉素/,羧苄青霉素/的选择
,
./溶液中,离心并溶于开始长出愈伤,有的直接分化出绿芽见图版
/中,取加入~ , 以上的外植体能分化出愈
腿,冰浴,液氨冻,
热击,加在℃振荡培养~ 时,切下转移到生根选择培养基中,~周
.涂平板,在/卡那霉素, ,成
/链霉素,筛选培养. 活率达见图版之.
. 烟草转化及转基因植株再生. 抗生素对芽分化频率的影响
采用农杆菌叶盘法进行烟草转