文档介绍：福建农林大学
硕士学位论文
根癌农杆菌介导ACS反义基因转化文心兰的研究
姓名:金苹
申请学位级别:硕士
专业:园林植物与观赏园艺
指导教师:赖钟雄
20090401
,是热带气生兰,因其花形独特、花姿优美、花色亮丽,而倍受人们的喜爱,市场需求量正迅速增长。本研究以“小樱桃”文心兰试管苗的叶片和根切段为材料诱导原球茎,建立文心兰高效再生系统和受体系统,并采用根癌农杆菌介导法对文心兰原球茎进行匆寤蛞糯;难芯俊V饕Q芯拷峁缦拢文心兰高效再生系统的建立。以文心兰试管苗的叶片和根切段为材料,研究了文心兰再生系统建立的有效途径。试验结果表明,文心兰叶片在/呐嘌希蚓ビ盏悸蚀%,优于根切段在此培养基上的诱导率,因此叶片适宜作为文心兰原球茎的诱导材料;以为基本培养基时,、ǘ确直鹞././保蚓ピ鲋诚凳撸辉蚓シ只淖钍逝嘌选择/蛔罴训淖趁缟嘌//苹果汁篖;在文心兰炼苗移栽时宜选择水草作为移栽基质。男睦际芴逑低车慕⒓捌溆呕T谖男睦家糯;芯恐校舨捎媒洗罂帕5脑球茎为受体易产生嵌合体,不利于后期的鉴定筛选,这就要求对原球茎的生长条件进行优化,以获得适宜遗传转化的细小、颗粒状明显的原球茎受体材料。因此,试验以文心兰试管苗的叶片诱导出的原球茎为材料,比较不同激素配比、基本培养基、值、糖类型和糖浓度、光照条件、抗生素对文一荚蚓ドさ挠跋欤⒍愿饕蛩亟杏呕秆∽罴训氖芴宀牧生长条件,以建立适于遗传转化的受体系统。试验结果表明,最适宜建立文心兰原球茎受体系统的培养基是/渥罴雅嘌跫疞白糖为最佳糖源和糖浓度、为、琼脂浓度为光照强度及娴呐养温度。文心兰原球茎对卡那霉素敏感,./敲顾啬芄挥行У匾种圃蚓サ纳并使其致死,而./敲顾啬芄挥行У匾种莆醋;仓甑纳虼耍/那霉素和./敲顾胤直鹞N男睦冀幸糯;痹蚓ナ芴逑低澈托∶缟养的有效选择压浓度。┡└司榈糀反义基因导入文心兰转化体系的确立。试验结果表明,└司号ǘ萇为,农杆菌重悬液白糖浓度为./└;珿瞬时表达检测,在最优转化条件下,文一荚蚓サ腉瞬时表达率为.%。男睦伎剐栽蚓ァ⒖剐灾仓甑纳秆〖白;蛑仓暌圃浴6宰;疉反义基因的原球茎进行抗性筛选及转基因植株再生研究,采用延迟筛选法先对侵染过的原球茎在/嘌辖谢指瓷僦鸩教岣福建农林大学硕士学位论文./疞、//Ⅱ
卡那霉素浓度后,置于一/嘌律秆个月,选择后的原球茎置于分化培养基上进行分化培养,将分化的小苗转移到/苹果汁/秆∽趁缟嘌薪猩嘌3醪焦鄄熳;蛑仓在生物学性状上与未转基因植株无显著差异,转基因植株移栽鲈潞蟪苫睢男睦伎剐灾仓甑募觳狻6晕男睦伎剐栽偕仓甑囊镀蠫稳定表达检测和匆寤颉基因的觳狻J匝楣不竦昧株由抗性原球茎分化出的小苗,其中株在卡那霉素抗性筛选中生根,生根的抗性植株经橹Ъ觳夂歪蹸虻腜检测有昀┰龅侥康奶醮醪街っ鰽反义基因和蛞颜合进文心兰基因组中。总之,本研究建立了文心兰高效再生系统;获得了淡黄色、颗粒状明显的原球茎受体材料,建立了适宜遗传转化的受体系统;首次将匆寤蜃H胛男睦疾⒔⒘宋榷ǖ囊传转化体系;摸索出了文心兰抗性原球茎的筛选方法和筛选时期;发现在不使用时,高浓度糖处理可以提高农杆菌转化文心兰原球茎的转化效率。这为选育花期延长的文心兰新种质,延长文心兰切花的寿命开辟了新途径,为文心兰转基因的研究提供了技术平台。关键词文心兰;原球茎;匆寤颍灰糯;桓┡└司福建农林大学硕士学位论文摘要/:./甿/疞/
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沙护”驷论文使用授权的说明独创性声明本人声明,所呈交的学位弦论文,是本人在指导教师的指导下独立完成的研究成果,并且是自己撰写的。尽我所知,除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的地方外,论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的同志,都在论文中作了明确的说明并表示了谢意,如被查有侵犯他人知识产权的行为,由本人承担应有的责任。学位弦论文作者亲笔签名:日期:本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位弦论文的规定,即学校有权送交论文的复印件,允许论文被