文档介绍：植物单细胞培养技术
周口师范学院生命科学系
1 植物单细胞培养的意义
有利于观察细胞个体的分裂、分化、生长和繁殖情况;
有利于获得纯细胞系;
有利于进行细胞特性、细胞生长规律、细胞代谢过程及其调节控制规律等方面的研究;
有利于生物转化和天然化合物的生产。
2 植物单细胞的分离技术
从外植体直接分离单细胞
从愈伤组织分离单细胞
通过原生质体再生法获得单细胞
从外植体直接分离单细胞
外植体经过切割、捣碎或酶解,然后经过一定孔径的不锈钢筛网过滤,得到细胞悬浮液。
悬浮液中所含的完整细胞数量较少,但分散性好。
从愈伤组织分离单细胞
将愈伤组织进行振荡培养,使其分散成小的细胞团或单细胞,然后用适当孔径的不锈钢筛网过滤,除去大的细胞团和残渣,离心除去小的残渣,得到单细胞悬浮液。
为了增强分散效果,必要时可添加适量的果胶酶,使由果胶粘连在一起的细胞分开。
通过原生质体再生法获得单细胞
外植体、愈伤组织或细胞团经过纤维素酶和果胶酶等的作用,除去细胞壁而获得原生质体。
原生质体
再生细胞壁
外植体
愈伤组织
单细胞悬浮液
愈伤组织
再生植株
酶解
3 植物单细胞的培养方法
平板培养法(1960年,Bergman)
看护培养法(1954年,Muir )
微室培养法(1960年,Jones)
1 单细胞悬浮液的制备
2 单细胞悬浮液的密度调整
3 固体培养基的配制
4 单细胞悬浮液与固体培养基等量混合
5 暗培养
6 继代培养
平板培养法
程序:
1 单细胞悬浮液的制备
单细胞来源:
平板培养法
程序:
外植体(叶肉细胞)
愈伤组织
原生质体
2 单细胞悬浮液的密度调整
要求:调整后的密度为植板细胞密度的2倍
调整方法:①如果密度过大,加入液体培养基进行稀释;
②如果密度小,通过低速离心使细胞沉降后,再加入适量液体培养基。
平板培养法
程序: