【高级资料】2014年【生物技术】第五讲(1)植物细胞悬浮培养技术.ppt

文档介绍：植物细胞
悬浮培养技术
单细胞的分离
由完整的植物器官分离单细胞
由培养组织(如愈伤组织)
中分离单细胞
1 由完整的植物器官分离单细胞
机械法
酶解法
叶片是分离单细胞的最好材料
机械法
方法A:用刀片刮叶片
(花生成熟叶片)
具体方法:
撕去表皮
露出叶肉细胞
用解剖刀刮下细胞
方法B:叶片研碎、离心
轻轻研磨
加研磨介质
过滤、离心
研磨介质:40ml
20umol Sucrose
10umol MgCl2
20umol tris—HCL (三羟甲基氨基甲烷)
PH
注意:只有薄壁组织排列松散,细胞间结触点很少时用机械法分离叶肉细胞才能取得成功。
注意:大麦、小麦和玉米很难通过酶解法使细胞分离。
(叶肉细胞伸长,并在许多地方收缩,细胞间形成一种互锁结构)
事例分离篱天剑叶肉细胞的机械方法
叶片消毒
匀浆
过滤
离心
植板
75%酒精,
7%次氯酸钠
10ml培养基

低速,去碎屑,游离细胞沉降
酶解法
Takebe等(1968)最早报道:用果胶酶处理可以分离大量的叶肉细胞
加果胶酶
过滤、离心