文档介绍：第三军医大学
硕士学位论文
HPV分型检测寡核苷酸芯片的初步研究
姓名:卓勤强
申请学位级别:硕士
专业:遗传学
指导教师:刘昕
20060501
蛐趣兰论文作者签名己莛垫垡:殛』:￡:丛,日期:地:。第三军医大学研究生学位论文独创性声明第三军医大学研究生学位论文版权使用授权书秉承学校严谨的校风和科研作风,本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名:指导教师签名:期:日
英文缩写词//‘瓻中文全称氨苄青霉素碱基对花菁类荧光素三磷酸脱氧核呛苷脱氧三磷酸尿苷乙二***四乙酸乳头状瘤病毒千碱基对光密度多聚酶链式反应转,分ご姿帷缓冲液づ鹚帷缓冲液·撼逡解链温度三羟***氨基甲烷标准枸椽酸盐溶液尿嘧啶一腔讳逡一***一贿胚嵋籅—肴樘擒—一一籭—狣—/:狟—猼猤’‘
...—,.琺..—瓸.,瓻瓹,
;;
中图觳夤押塑账嵝酒某醪窖芯摘要时际酰ǜ梅椒ḿ觳馔康停桓龇从苤兄荒芗觳庖桓鲅切停岩月懔俅背景人类乳头状瘤病毒,属于易澹且种双链环状《荆笮≡,目前已发现了嘀盅切汀感染是宫颈癌发生的主要病因,持续高危型母腥臼前┣安”浜徒笮怨卑┓⒄沟谋要因素。由于不同亚型闹虏』坪椭掳┪O招愿鞑幌嗤虼硕訦各亚型进行分型检测有重要的临床意义。目前,临床上对蟹中图觳庵饕R揽坑ü馐上同时检测多个亚型的需要。本研究探讨了利用寡核苷酸芯片技术同时检测喔亚型的可能。目的建立带有不同亚型基因片段的哺乳动物细胞克隆;在此基础上初步探讨利用寡核苷酸芯片技术对姆中图觳獾目赡堋方法⒔⒋胁煌切虷基因片段的哺乳动物细胞克隆用做标准阳性对照。⑹占疦菘庵械腍各亚型的序列信息,设计相应的探针。⒗没蛐酒际跫坝ü舛縋方法对蟹中图觳狻结果⒊晒寺×龉卑┫喙匮切虷基因片段,成功构建并筛选出携带有餮切蚅蚱蔚南赴辍⒊醪街票赋隹梢苑中图觳釮的寡核苷酸芯片并建立了相应的检测方法。结论应用重叠延伸姆椒ǎ晒寺×龉卑┫喙匮切虷基因片段并构建鲂蠬各亚型基因片段的细胞株;初步初步制备出可以分型检测墓押塑账嵝酒⒔⒘讼嘤Φ募觳夥椒ā关键词:卑┕押塑账嵝酒咏第三军医大学硕士学位论文
中图觳夤押塑账嵝酒某醪窖芯对募觳庵饕Mü肿由镅Х椒ɡ唇小T咏徊痘不能具体分型,并且使用时需要其配套仪器——基因信号扩大仪,价格昂贵,应用很刖罱人乳头瘤病毒是一种小型《荆蜃镈为环状,大小约。根据其基因的差异分为嘀盅切汀。年提出腥居牍卑有密切关系,年虸獺确定为宫颈癌的病因2煌切虷的致病机制和致癌危险性各不相同,根据餍胁⊙Х掷啵渲鲅切虷为高危型,鲅切臀?,因此榇采嫌斜匾=⒁恢旨虮恪⒖焖佟⒘槊簟⑻匾的分型检测方法。是目前唯一经美国加τ糜诹俅驳腍检测方法,但是只能区分高危、低危,受限制。临床上对蟹中图觳庵饕R揽坑ü馐凳盤技术,但该方法检测通量低,不能同时检测多个亚型;应用头肿有疟甓縋的:方法对蟹中图觳猓匾煨院芎茫铱梢远匝镜腍进行相对定量,但是他们仅能区分出鯥亚型对恫荒苈足需要。本研究的目的是建立带有不同亚型基因片段的哺乳动物细胞克隆并初步探讨寡核苷酸芯片技术对姆中图觳狻第三军医大学硕士学位论文琀§
基因片段的细胞克隆的建立第一节带有不同亚型材料法胊核酸提取试剂盒方我们在进行微生物的分子生物学检测时,必须有合理的阳性对照,才能得到令人信服的检测结果H死嗳橥纷戳霾《疚薹ń刑逋馀嘌蚨苣鸦竦媒虾玫难粜对照,这也成为人们研究中图觳獾牡囊桓銎惹行枰=饩龅哪烟狻@肔鉴别捅鹗墙昀碒分型的一个最重要的进展,这一理论已经得到了公认并且已经应用于实际工作‘’】。在本实验中我们通过人工合成各切蚅蚱段,并将这些片段转入哺乳动物细胞以解决这一难题。一、模板餮切虳序列由上海博亚生物有限公司合成。二、工程菌:1臼冶4妗三、细胞:狝—赴辏喝朔蜗侔┫赴辏1臼冶4妗四、