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优选第九讲基因操作的工具酶
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在DNA分子水平的操作中,依赖于一些重要的酶,如限制性核酸内切酶、连接酶等,作为工具对DNA进行切割和拼接,这些酶统称为基因工程工具酶
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基因工程必需的两个工具酶
“分子
剪刀”
⒈限制性核酸内切酶——在DNA上核苷酸的特定连接处以特定的方式把DNA双链切开。如EcoRI,HpaI
“分子胶”
⒉DNA连接酶——促使具有互补粘性末端或平头末端的载体和供体DN***段连接,形成重组DNA分子
一、工具酶概念
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限制性内切酶与DNA连接酶
细菌细胞内特异性降解外源核酸分子的核酸酶,其作用特点是:
特异性降解异源DNA分子(***化修饰差异)
I类限制酶随机切割双链DNA分子,II类限制酶识别、切割特殊的回文(对称)序列
来源不同、具有相同粘性末端DN***段在DNA连接酶的作用下可准确连接形成重组DNA分子
通常使用来自T4噬菌体DNA连接酶
一、工具酶概念
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核酸
核酸水解酶类
核酸合成酶类
核酸修饰酶类
核酸内切酶
核酸外切酶
DNA聚合酶
RNA聚合酶
DNA连接酶
***化酶
核苷酸激酶
核苷酸转移酶
磷酸酶
一、工具酶概念
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常用的工具酶
工具酶类
功能
限制性核酸内切酶
特异性识别和切割DNA
T4DNA连接酶
生成3′-5′磷酸二酯键
DNA聚合酶Ⅰ(Klenow片段)
探针标记、补平3′末端
反转录酶
cDNA合成
多聚核苷酸激酶
5′磷酸化、探针标记
末端脱氧核苷酰转移酶
3′末端多聚尾
碱性磷酸酶
切除末端磷酸基
TaqDNA聚合酶
DNA合成、PCR
一、工具酶概念
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定义
发现
限制—修饰系统
分类
命名
特性
影响内切酶酶切反应的条件
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5’
5’
GCAATGCTTAGCCAT
CGTTACGAATCGGTA
核酸外切酶
核酸内切酶
核酸外切酶

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5’
5’
GCAAGCTTTAGCCAT
CGTTCGAAATCGGTA
限制性核酸内切酶

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