文档介绍：为什么pcr扩增得到的目的基因不能直接用于连接反应
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? 2011-03-21PCR2010-11-11pcr技术扩增目的基因的过程需不需要ATP?为什么? 34 没把目的基因扩增是什么原因 2 方法扩增目的基因不用解旋酶 10 2009-05-16为什么 PCR2009-05-31PCR扩增目的基因时为什么要冷却 4 PCR技术扩增目的基因”是获取目的基因的步骤?2010-04-30为什么“利用
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其他7条回答
2010-10-24 21:21jinrongyu613 | 十四级
原因很多,引物没有设计好,模板浓度过低等等
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2009-04-20 18:30热心网友
因为PCR产物不一定带有连接需要的粘性末端~~~
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2009-04-25 09:42wenkop301 | 三级
不同的反应是在不同的缓冲反应体系下进行,所以分子实验的一个原则是,在进行下步实验时,要经可能将上步实验中残留的缓冲体系去除干净,否则残留的缓冲体系将会影响后续反应体系的缓冲能力,干扰后续实
验。补充一下。是否产物为粘性末端和平末端并不重要,因为对于两种产物都有不同的载体进行连接。评论| 2 0
2009-04-25 11:31 | 四级
谁说不可以?我一直嫌回收纯化目的条带麻烦,所以我一直用PCR产物连接T载体,没问题
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2010-10-25 09:55songbocui66 | 五级
引物设计出现问题的话,可能会出现引物二聚体,不能同模板结合,也就扩增不出基因片段。
要选择适宜的退火温度,温度太高影响引物同模板结合效果。
DNA模板浓度不能太低,但这个条件不是影响PCR反应的决定性因素。
我曾经遇见过PCR仪器出现故障导致扩增失败的现象。
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2010-10-27 14:33olivia2010lm | 三级
:引物设计是否合理
:温度,时间的选择。酶、稀释液的浓度等等
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2010-11-02 23:43wen1heng | 三级
PCR 反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR 循环条件。寻找原
因亦应针对上述环节进行分析研究。
模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq 酶抑制剂,③模板中蛋白质没有消化除净,特别是染色体中
的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚。⑤模板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时,不出现扩增
带,极有可能是标本的消化处理,模板核酸提取过程出了毛病,因而要配制有效而稳定的消化处理液,其程序亦应
固定不宜随意更改。
酶失活:需更换新酶,或新旧两种酶同时使用,以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。需注意的是
有时忘加Taq 酶或溴乙锭。
引物:引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称,是PCR 失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见
原因。有些批号的引物合成质量