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基因多态性检测技术:
一DNA测序技术(DNAsequence)
二基因芯片(genemicroarray)技术
三实时定量PCR(RealtimePCR,RT-PCR)技术
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一DNA测序技术
从1977年第一代DNA测序技术(Sanger法),发展至今三十多年时间,测序技术已取得了相当大的发展,从第一代到第三代乃至第四代,测序读长从长到短,再从短到长。下面我们就一一介绍前三代测序技术。
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第一代测序技术
Sanger法核心原理是:由于ddNTP的2’和3’都不含羟基,其在DNA的合成过程中不能形成磷酸二酯键,因此可以用来中断DNA合成反应。
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第二代测序技术
第一代测序技术的主要特点是测序读长可达1000bp,但其测序成本高,通量低严重影响了真正大规模的应用。而经过不断的技术开发和改进,以Roche公司的454技术、illumina公司的Solexa,Hiseq技术和ABI公司的Solid技术为标记的第二代测序技术诞生了。
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(1)DNA待测文库
构建
(2)Flowcell
(3)桥式PCR扩增
与变性
(4)测序
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(1)DNA文库制备
(2)EmulsionPCR
(3)焦磷酸测序
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第三代测序技术
以PacBio公司的SMRT和OxfordNanoporeTechnologies纳米孔单分子测序技术,被称之为第三代测序技术。
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