文档介绍：该【第六章真核基因在大肠杆菌中的表达】是由【qinqinzhang】上传分享，文档一共【105】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【第六章真核基因在大肠杆菌中的表达】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。真核基因的大肠杆菌表达体系
大肠杆菌的表达载体
克隆的真核基因在大肠杆菌细胞中的表达
影响克隆基因在大肠杆菌中表达效率的因素
现在是1页\一共有105页\编辑于星期四
大肠杆菌表达体系
克隆基因正确表达的基本条件
克隆基因表达活性的检测
现在是2页\一共有105页\编辑于星期四
,特别是基因表达调控的分子机理有深刻的了解;
全基因组测序,共有4405个开放型阅读框架
,拥有各类适用的寄主菌株和不同类型的载体;
、高水平的表达;
、操作简单、成本低廉,易用于批量生产。
优越性:
大肠杆菌表达体系
现在是3页\一共有105页\编辑于星期四
,在结构上同原核基因之间存在着很大的差别。
。
细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子;外源基因可能含有具大肠杆菌转录终止信号功能的核苷酸序列。
,影响真核基因mRNA稳定性。
大肠杆菌表达体系
大肠杆菌中表达体系的不足
现在是4页\一共有105页\编辑于星期四
,都要经过转译后的加工修饰(正确折叠和组装),而大多数的这类修饰作用在细菌细胞中并不存在;
,能够识别外来的真核基因所表达的蛋白质分子,并把它们降解掉。
大肠杆菌表达体系
现在是5页\一共有105页\编辑于星期四
最基本条件:应该能够进行正常的转录和转译,以及在正常情况下还与转译后加工及新生多肽在细胞中的分布有关。
重要条件:编码的蛋白质产物应能维持正常的稳定性。
克隆基因正确表达的基本条件
现在是6页\一共有105页\编辑于星期四
具有核糖体结合位点;
具有克隆基因的功能(强)启动子;
插入序列的正确取向。
克隆基因正确表达的基本条件
现在是7页\一共有105页\编辑于星期四
;
;
。
克隆基因表达活性的检测
现在是8页\一共有105页\编辑于星期四
这是一种适于检测质粒基因表达的体内检测法。
微细胞:指由某些细菌突变体菌株在其生长期间连续产生的一类微小的圆形的无核细胞。
微细胞检测法
克隆基因表达活性的检测
现在是9页\一共有105页\编辑于星期四
通过蔗糖梯度离心将微细胞与正常细胞分开,含有质粒载体的微细胞是适于检测重组子质粒所携带的外源基因表达状况的理想体系。
克隆基因表达活性的检测
现在是10页\一共有105页\编辑于星期四