文档介绍：实验四血清γ-球蛋白的提纯
【实验目的】
、凝胶层析、透析法分离纯化蛋白质的基本原理及操作;
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实验原理
【实验原理】
(一)盐析法
定义:加入大量中性盐以破坏蛋白质的稳定因素并
使从溶液中沉淀析出的现象。
原理: 破坏蛋白质两个稳定因素:水化膜和电荷层
中性盐:(NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl等。
优点:蛋白质不变性,常用。
(二)透析法
定义:利用半透膜把大小分子分开的方法。
材料:特制的半透膜,截止分子量一般为一万。
临床应用:血液透析
(三)层析法
待分离物质随(流动相)经过一个固态物质(固定相)时,根据溶液中待分离物质颗粒大小、电荷多少及亲和力等,使待分离蛋白组分在两相中反复分配,并以不同流速流经固定相实现分离。
凝胶层析法
(四)离心技术
离心技术是将含有微小颗粒的悬浮液置于离心转子中,利用转子绕轴旋转产生的离心力将微小颗粒按密度或质量的差异将其分离的方法。
沉降速度(v) 指在强大的离心力作用下,单位时间内物质颗粒沿半径方向运动的距离。 v=×10-4×D2(ρ-ρm)n2r/ηm
D —颗粒直径
ρ—颗粒的密度
ρm —介质的密度
ηm—介质粘度
r —旋转半径(物质质点所处位置与旋转中心的距离) N —转子转速
人血清中几种主要蛋白组分
血清蛋白质
等电点
分子量
占总蛋白的%
清蛋白
69,000
57~72
α1-球蛋白
200,000
2~5
α2-球蛋白
300,000
4~9
β-球蛋白
90,000~150,000
~12
γ-球蛋白
~
156,000~950,000
12~20