文档介绍：基因敲除小鼠
2011年5月9日
赛业(广州)生物科技有限公司
ES细胞囊胚显微注射
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服务描述
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注射ES细胞制备
1. 胚胎干细胞在显微注射前必需通过MAP检测,无鼠源相关病原菌,很多基因敲除鼠应用于医药和疾病方面研究,相关病原菌进入小鼠后会影响到后续实验结果
       
2. 早代数、培养在滋养层上的胚胎干细胞更易于产生生殖系传递的能力
,用于注射的ES细胞要尽量去除饲养层细胞
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标准品系
标准品系:
囊胚品系:C57BL/6XC57BL6;
ES品系:129;
非标准品系:
备注:若客户有需求,我们可以提供FVB、ICR、DBA/2和B6D2F1(♀C57BL/6 × ♂DBA/2)品系小鼠囊胚
ES囊胚原核注射
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通过基因打靶的方式将目的基因导入ES细胞,将打靶基因成功导入的ES细胞注射到小鼠的囊胚腔中获得嵌合体小鼠,获得的嵌合体小鼠有的组织来源于ES细胞,有些组织来源于囊胚。这样,获得的嵌合体小鼠可能有部分生殖细胞来源于注射ES细胞
将获得的嵌合体小鼠和野生型小鼠交配,以确定嵌合体小鼠的生殖系传递能力,最后保留有生殖系传递能力小鼠,这就可以获得靶基因成功导入的转基因小鼠
注射囊胚的回植
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ICR,用于代孕鼠制备;优点:母性好、吃崽少、繁殖快
C57BL/6
DBA/2
B6D2F1,用于制作结扎公鼠;优点:维持假孕小鼠时间长
ES注射后代小鼠的鉴定
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嵌合体小鼠一般通过毛色和性别进行鉴定。
:
1)选择的ES的小鼠的毛色;
2)选择囊胚的小鼠的毛色;
3)所选择的两种小鼠的相融性(即后代生殖系遗传能力)。
一般的规律:agouti对black为显性;black对白化为显性。但是有一个特殊Balb/c小鼠与C57BL/6交配后代小鼠毛色为agouti。
由于注射的胚胎干细胞是XY基因型,虽然所获得的嵌合体小鼠有雄鼠和雌鼠,但一般只有雄鼠能够保持生殖系的传递,这样所获得的嵌合体小鼠将大部分是雄性
ES品系有:129    (agouti)JM8    (black)JM8 A3 (agouti)囊胚品系有:C57BL/6 (black)白化C57BL/6 (白化)Balb/c (white)
ES注射后代小鼠的鉴定
ES注射后代小鼠的鉴定及F1代的获得
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