文档介绍：总DNA的提取
(1)菌体培养:接种于LB液体培养基,于30℃振荡培养24-36 h,获得足够的菌体。
(2)菌体收集: mL离心管中,10000 r/min离心1 min,弃上清,收集菌体。
(3)裂解:向每管加入180μL裂解缓冲液[缓冲液含(终浓度)20 mmoL/L Tris-HCl,pH ,2 mmol/L乙酸钠,%Triton,终浓度为20 mg/mL溶菌酶,37℃处理30 min以上。
(4)向每管加入20μL蛋白酶K溶液,混匀后
(5)加入220μL缓冲液GB,振荡15 s,70℃放置10 min,溶液应变清亮,简短离心以除去管盖内壁的水珠。
(6)加入220μL无水乙醇,充分振荡混匀15 s,离心以除去管盖内壁的水珠。
(7)将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中,12000 r/min离心30 s,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
(8)向吸附柱CB3中加入500μL缓冲液GD,12000 r/min离心30 s,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
(9))向吸附柱CB3中加入700μL漂洗液PW,12000 r/min离心30 s,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
(10)向吸附柱CB3中加入500μL漂洗液PW,12000 r/min离心30 s,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
(11)将吸附柱CB3放回收集管中,12000 r/min离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
(12)将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μL洗脱缓冲液TE,室温放置2-5 min,12000 r/min离心2 min,将溶液收集到离心管中。
琼脂糖凝胶电泳
(1)制胶:称取琼脂糖粉末,置于三角瓶中,%的浓度,加热使琼脂糖全部融化于缓冲液中,待溶液温度降至65℃时加入GoodView核酸染料(2-5μL/100 mL琼脂糖凝胶),立即倒入制胶槽中,插入样品梳。-1 h,待凝胶全部凝结后,轻轻拔出样品梳。然后在电泳槽中加入电泳缓冲液直到没过凝胶为止。(2)点样:将提取的总DNA与lodingbuffuer混匀后小心地加到样