文档介绍：一种快速微量外周血基因组DNA 的提取方法
配制 6 mol/ LNaI 中含10 mmol/ L 2 - 巯基
乙醇,置棕色瓶中室温保存至少1 年。
1. 3 方法
取EDTA - NaI 抗凝血100μl 加入1. 5 ml 离心
管中,加入1000μl 无菌去离子水,轻轻颠倒5~10
次,5 000 r/ min 离心3 min ,弃去上清液1000μl ,加入
6 mol/ L Nal100μl ,混旋10 s ,加入200μl ***仿∶异戊
醇(24∶1) ,混旋30 s ,10 000 r/ min 离心3 min ,取上清
液150μl 于另一离心管中,加入90μl 异丙醇,混匀
后,10 000 r/ min 5 min ,弃去上清液, 加入1 000μl
75 %无水乙醇洗涤沉淀2 次,再加入1 000μl无水乙
醇洗涤沉淀2 次,沉淀置56 ℃烘干20 min ,加入50
μl 无菌去离子水或50μl TE 溶液即可用于基因扩增
和限制性内切酶酶切分析等分子生物学试验。
曹
外周血DNA 提取方法的比较及改良
1. 2 方法
1. 2. 1 DNA 的提取
1. 2. 1. 1 常规酚/ ***仿提取法取枸橼酸钠抗凝
血80μl ,操作方法见参考文献[1 ] 。
1. 2. 1. 2 碘化钾提取法取100μl EDTA2Na2抗
凝血,提取法见参考文献[2 ] 。
1. 2. 1. 3 TKM2血液DNA 提取法取2 ml 含抗
凝剂的全血加入2 ml 已配制好的溶液Ⅰ缓冲液(10
mmol Tris2HCl pH 7. 4 ,10 mmol KCl 10 mmol Mg2
Cl2 2 mmol EDTA) 和50μl NP240 ,旋涡振荡器上充
分混匀,3 000 r/ min 室温离心10 min ,弃上清,细胞
沉淀中再加溶液Ⅰ缓冲液,混匀后再离心,如此反
复3 - 5 次,直至上清由红色变为无色。在含白细
胞沉淀的试管中加入0. 32 ml 溶液Ⅱ(溶液Ⅰ中加
0. 4 mol NaCl) ,将白细胞再悬浮,然后加入50 μl
10 % SDS 和0. 30 ml 饱和NaCl 混匀,室温下轻摇
过夜后,室温12 000 r/ min 离心10 min ,取上清加
等量异丙醇或3 倍体积的乙醇,摇匀,置- 20 ℃1 h
以上沉淀DNA ,13 000 r/ min 离心25 min ,弃上清,
四种微量全血DNA 提取方法的比较
TT (TritonX-100 和Tris-HCl等混合液的总
称)溶血法提取基因组DNA-/0
试剂裂解液# g蔗糖"5 ml mmol/L
M gCl2"2 ml mmol/L Tris(HCl ()"1 ml TritonX-
100"加水至100 ml’提取液#10 ml mmol/L
KCl" mmol/L M gCl2"2ml mmol/L Tris(
HCL ()" ml NP-40" ml Tween-20"加
水至100 ml’蛋白酶K 20 mg/ml (贮存液)’Tris平衡