文档介绍：动物细胞的融合
Cell Fusion
实验原理
1. 细胞融合,即在自然条件下或利用人工方法(生物的、物理的、化学的),使两个或两个以上的细胞合并成一个具有双或多核细胞(异核体细胞)的过程。随后,异核体细胞进行有丝分裂,核膜崩溃,来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞。
2. 细胞融合的方法:
细胞融合的基本概念
二、人工诱导下:
1、病毒诱导融合(仙台病毒)
2、电融合
3、激光融合
4、化学融合(PEG)
一、自然条件下:精卵融合
Skeletal muscle
利用PEG介导的动物细胞融合,其实验原理到目前为止还没有完全定论。学者们一般认为,PEG改变各类细胞的膜结构,使两细胞相互接触部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散、进而使其结构发生重排,再加上膜脂双层的相互亲合以及彼此间表面张力的作用,引起相临的重排质膜在修复时相互合并在一起, 使两细胞的胞质沟通, 从而造成相互接触的细胞之间发生融合。
PEG促融合机制
实验原理
PEG的分子量与浓度: 细胞融合效果与PEG的分子量及其浓度成正比;但PEG的分子量越大、浓度越高, 对细胞的毒性也就越大。为了兼顾二者,在实验时常常采用的PEG分子量一般为1000~4000,浓度一般为40~60%。
PEG的pH值: 经验证,~。
PEG的处理时间: 处理时间越长,融合效果越好, 但对细胞的毒害也就越大。故一般将处理时间限制在1分钟之内。本实验中细胞融合后无需继续培养, 故处理时间可适当放宽至5~10分钟。
融合时的温度: 由于生物膜的流动性与温度成正比,故细胞的融合效果也与温度成正比。因此,为了获得更好的融合效果, 在细胞可能承受的温度范围内可适当提高处理的温度。对于哺乳动物的细胞, 一般采用的温度为37~40℃。
影响PEG融合效果的几种因素:
实验原理
本实验所用材料为鸡的血细胞,这是因为:
鸡血细胞具有细胞核,便于对融合细胞进行鉴别;
2. 实验材料廉价、易得。细胞融合与否,可通过观察细胞内核的数目来进行鉴别。细胞内只有一个核,定为未融合细胞;有二至多个核,定为融合细胞。
关于实验材料
实验原理
实验步骤
1、取10%鸡红细胞悬液1 ml移入离心管中,加Hanks液至5 ml ,混匀;
2、1000 rpm离心2 min,倾去上清液,加入5 ml Hanks液再次悬浮细胞,混匀,再次离心2min,弃