文档介绍：铁皮石斛的组织培养技术
摘要:铁皮石斛(DendrobiumofficinaleKimuraetMigo.)是兰科(Orchidaceae)石斛属(DendrobiumSw.)多年生草本植物。铁皮石斛为石斛之极品,它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛是传统名贵中药材,有生津益胃、清热养阴和清咽利嗓等功效,主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂。铁皮石斛蒴果成熟时易开裂,且种子粒径小,自然繁殖率低。为了保护和有效利用铁皮石斛,通过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要。
关键词:铁皮石斛组织培养
目前铁皮石斛的组织培养技术非常成熟,有大量关于其组织培养及快繁体系成功建立的报道,大都以茎段、根尖、茎尖、原球茎和种胚等为外植体。除了固体培养外,近几年来还出现了一些关于铁皮石斛液体悬浮培养的报道。
一、茎段培养

(1)诱导培养基①MS+。++AC(活性炭)29/L;②MS+6-++AC29/L。
(2)增殖培养基花宝3号39/L++。+AC29/L。
(3)生根培养基1/2MS++AC29/L。培养基中添加蔗糖209/L,~,培养温度(25-!-2)℃,连续光照培养时间为12h/天,光照强度1500~2000lx。

从铁皮石斛植株上切下长2~5cm的幼嫩茎段,在流水下冲洗,用刷子蘸少许洗衣粉水溶液轻轻刷洗,并经自来水充分洗净。在超净工作台上将茎段放置在75%的酒精中消毒30s后,%的HgClz水溶液浸泡8~10min,无菌水冲洗5~6次。

用解剖刀将铁皮石斛的幼嫩茎段切下,接种在诱导培养基①中进行培养。15~20天后,外植体开始萌动,茎段膨大,切面及顶部组织形成疏松组织。继续培养20天后,转入培养基②中,切面及顶部膨大组织的表面形成凹凸不平的颗粒物,随着培养时间的延长,颗粒物长大形成直径1~2mm的类原球茎颗粒物。

将诱导形成的原球茎转入到增殖培养基中,原球茎增殖速度很快,增殖倍数可达3~4倍,同时部分原球茎开始分化出芽点并长出1~2片小叶,原球茎的增殖与芽分化同时进行。

待增殖芽数量较多时,将高1~2cm、带有2~3片叶的小芽切下转入生根培养基上进行生根培养。培养30天左右,基部开始出现2~3条约1cm长的白色根,随后逐渐伸长,生根率达到90%以上。

当苗高3cm以上、具3~4片叶时,便可出瓶移栽。移栽前,将生根瓶苗打开瓶盖,移至常温下炼苗7天,然后将瓶苗取出,洗去附着在根部的培养基,%的高锰酸钾溶液浸泡8~10min,栽种于已灭菌的碎树皮基质中(移栽前浇透水),放置在遮光度50%~60%、湿度达80%以上的温室中,2个月后,成活率达90%以上。
二、种子培养(胚培养)
取人工授粉的铁皮石斛果实,用75%的酒精表面消毒,%升***消毒8分钟,无菌水冲洗4—5次。在无菌操作下,,接种到培养基上,每瓶3—5块。研究结果表明,N6培养基对种子萌发和生长最好,蔗糖浓度2%最佳,—