文档介绍：拟南芥提取DNA的方法
实验目的:提取拟南芥DNA,便于分子育种的目的基因克隆
试验仪器:台式离心机 (Eppendorf)、离心管多只、  研钵及研杵
、恒温水浴锅、多种规格的移液枪和枪头、
试验药品:   Edward 提取溶液[ 内含200 mmol/L Tri-Hcl( pH 值7. 5), 25 mmol/L
EDTA( pH 值8. 0), 250mmol/L N aCl 0. 5% SDS(W /V ) ]、***仿、异戊醇、异丙醇、RNAase、
试验材料:幼嫩的叶
实验步骤:
1、取拟南芥新鲜幼嫩的小叶片2~3片,,先加入   Edward 提取溶液100µL(便于研磨),用研棒充分地磨碎叶片,再加入提取液300µL,快速充分混合。
2、65℃水浴15分钟以上。
3、加入400µL(的***仿:异戊醇(24:1),4℃,12000rpm/min离心5分钟。
4、取上清300µ,加入等体积的异丙醇,混匀,4℃,12000rpm/min离心5分钟。
5、弃上清,70%乙醇洗涤沉淀2次,吹干。
6、沉淀用20~30µ RNAase A的ddH2O 溶解。贮存在–20 ℃冰箱里
7、%的琼脂糖凝胶检测提取的拟南芥DNA。
参考文献:杨双,阮燕晔等。一种简易的拟南芥幼苗微量DNA提取方法【J】沈阳农业大学学报,2005-02,36(1):99-100
徐平丽,赵晋平等。一种适宜拟南芥PCR检测的DNA提取方法【J】安徽农业科学,2010,38(13):6653-6654
籽用南瓜提取DNA的方法
吴会会
试验目的:提取籽用南瓜的DNA,用于转基因突变体的鉴定
试验器材:离心机、离心管、研钵和研棒、水浴锅、分光光度记、电泳设备
试验药品:提取液CTAB、***仿、异戊醇、异丙醇、RNAase、1% 的琼脂糖凝胶
试验材料:选取籽用南瓜新鲜叶片若干,装入塑料袋中,置于一7O℃冰箱冻存过夜。
试验步骤:
1、在50 mL 离心管中,加入20 mL 的CTAB (2﹪CTAB,100 mmol/L Tris—HCl (,2O mmo|/L EDTA, mmol/L Nacl),在65℃预热。
2、取约5 g在一70℃冰箱冻存过夜的南瓜叶片,研磨至粉末状,转移至预热的离心管中,混匀