文档介绍：微生物的纯种分离培养及接种技术
实验四

通过学习学习微生物的纯种分离,培养和接种技术,进而学会微生物生理生化反应的实验,为废水处理服务。在水处理的细菌检查中,细菌的分离,培养和接种也是一个重要的环节。微生物的纯种分离的方法有两种:稀释平板法和平板划线法。
二. 实验器材
(直径90mm),无菌吸管,无菌锥形瓶,无菌试管,5管无菌水(每管有9ml灭菌过的自来水)。
(已灭菌的),活性污泥。
3,接种环,酒精灯,恒温箱,等。
三. 实验内容
(一)培养基的制备及灭菌
1. 玻璃器皿的包扎与灭菌
(1) 六套培养皿一组, 用报纸包装。
(2) 取四支吸量管,在其吸端塞少许棉花后用长报纸条包扎。
(3) 干热灭菌:上述玻璃器皿在160°C烘箱内2小时。

在3支试管中各装入9ml自来水,塞上硅胶塞, 同下述培养基一起用高压蒸汽灭菌。
3. 培养基的制备
⑴称量:牛肉膏蛋白胨 NaCl 琼脂自来水
3g 150ml
⑵溶化:用烧杯在电炉上将上述各物依次溶解,注意补充水。
⑶调pH值: 溶液稍冷后用pH试纸、10% NaOH或10%HCl
调整溶液的。
⑷分装:试管4支各装其高度1/5的溶液,其余溶液装锥形瓶。
⑸加塞包扎:锥形瓶加棉塞并用牛皮纸包扎。
⑹湿热灭菌: (高压蒸汽灭菌)(103kPa)、
121℃灭菌 20min。
⑺搁置斜面: 试管培养基冷至50℃时斜搁使斜面长度不`
超过试管一半。
(二)微生物的分离、培养及形态观察
1. 平板划线分离法
(1) 倒平板: 将融化并冷至50℃的细菌培养基倒约15~20ml于无菌培养皿中,立即放在桌上轻轻转动使之均匀。冷后成平板。(3个)
(2) 划线:在火焰旁,左手拿平板,右手拿接种环,取一环菌液(原污水)在平板上划线。常用的方法有如下三种:
划线完毕后
盖上皿盖,倒置
于37℃恒温箱中
培养48小时后观
察结果。

(1) 取样…
(2) 稀释水样以无菌操作按十倍稀释法用无菌吸量管和无菌水将10-3倍的水样稀释至10-4、10-5、10-6倍。
(3) 平板制作将三套无菌培养皿编号,将上述三种浓度的水