文档介绍：荧光定量PCR在临床医学中的应用
内容提要
一、基因诊断技术简介
二、乙型肝炎的病原检测
三、丙型肝炎的病原检测
四、性病相关病原体的检测
基因诊断技术简介
4 基因诊断
3 免疫学诊断
临床诊断
细胞膜
细胞核
DNA
转录
mRNA
翻译
蛋白质
1 形态学诊断
2 生化诊断
概念
PCR与基因诊断技术
基因诊断即通过核酸的分子生物学检测直接检测基因的存在状态或缺陷对疾病作出诊断的方法。
Polymerase chain reaction(PCR),聚合酶链式反应,是一种DNA的快速扩增技术。PCR技术通过两个短的称为引物的DNA小片段和一种耐热酶的作用,可在3个小时内把特定的DNA片段扩增1000万倍。
九十年代中期PCR临床应用在国内全面开展,1998年,荧光定量PCR技术开始在中国应用于临床检测。
荧光定量PCR技术
实时荧光定量PCR技术,是指在反应体系中加入荧光标记,利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程,通过标准曲线对PCR终产物的分析,最终实现对未知的起始模版进行定量分析的一种技术,是迄今对已知基因序列的核酸测定中最灵敏的方法。
荧光染料:SYBR Green I、EVA Green
荧光探针:TaqMan、 Hybridization Probes 、Molecular Beacon
荧光定量PCR技术的优点
特异性强:直接扩增病原体的特异DNA或异常基因片段
灵敏度高:可检测到极少量的DNA,有效降低漏诊率
高效省时:扩增周期短,有利于快速诊断
取材范围广:血清、痰液、体液、毛发等多种样本
全封闭反应:无需PCR后处理,降低污染
定量准确:利用标准曲线法,采用对数期分析
自动化程度高:操作安全,避免人为判断
Roche
LightCycler