文档介绍：酶在食品分析中的应用
主要内容:
1 酶法分析的特点及应用类型
2 酶联免疫测定(ELISA)
3 聚合酶链式反应(PCR)
4 酶生物传感器
5 酶抑制率法
酶法分析的发展
酶在定量分析中的应用可以追溯到19世纪中期。当时,曾采用麦芽提取物作为过氧化物酶源,以愈创木酚作为共底物或指示剂测定过氧化氢。
然而,酶法分析真正的发展应归于它在临床实验室中的广泛应用。
酶法分析的发展
如早在1914年临床上就开始采用脲酶测定尿中的尿素,但是在临床实验室中酶分析的真正突破要推迟到1958年,当时转氨酶分析发展成为诊断肝病和心脏病的一个有效手段。
到了20世纪50年代前已有60种物质能借助于酶法分析。近年来,酶法分析发展迅速,广泛应用于临床检验、食品、环境等生物及其它样品的检测。
1. 酶法分析的特点及应用类型
酶的特性
酶法检测的特点
催化效率高
专一性
灵敏性强
快速
特异性、准确
不需要物理分离,干扰少
酶在食品分析中的应用类型
1. 去除样品中的杂质。如测定果糖、多糖等。
2. 催化待测物生成新的产物,而这种产物更容易被定量分析。如:淀粉的测定。
3. 测定食品中酶的活性作为食品的指标,如过氧化物酶的测定。
4. 利用酶催化反应所产生的一些信息。如酶联免疫法、酶电极法等。
2 酶联免疫测定(ELISA)
酶联免疫测定(enzyme-linked immunosorbent assay ,ELISA)是继放射免疫测定技术之后发展起来的一项新的免疫学技术。
ELISA自上世纪70年代出现开始,就因其高度的准确性、特异性、适用范围宽、检测速度快以及费用低等优点,在临床和生物疾病诊断与控制等领域中倍受重视,成为检验中最为广泛应用的方法之一。
ELISA的基本原理
(1)利用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接(或建立关联)。
(2)通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。
它将酶促反应的高效率和免疫反应的高度专一性有机地结合起来,可对生物体内各种微量有机物的含量进行测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。
重点
ELISA试剂盒的组成
完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:
(1)包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
(2)酶标记的抗原或抗体(标记物);
(3)酶作用的底物(显色剂);
(4)阴性和阳性对照品(定性测定),参考标准品和控制血清(定量测定);
(5)结合物及标本的稀释液;
(6)洗涤液;(含吐温20磷酸盐缓冲液)
(7)酶反应终止液。(常用硫酸)
必需
酶标仪和酶标板
DNM-9602A酶标分析仪
酶标板
ELISA的基本类型
随着ELISA在生物检测分析领域的广泛应用,根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,逐渐演变出了几种不同类型的检测方法:
(5)捕获法测IgM抗体;
(6)ABS-ELISA法;
(7)PCR-酶联免疫测定法;
(8)斑点免疫酶结合试验。
(1)夹心法;
(2)间接法;
(3)竞争法;
(4)双位点一步法;