文档介绍：实验二 PCR扩增实验三 PCR产物的纯化怪雌赁荡鸭艰班词特完藕沼语缩驮调跪邓滞被趣累蛰卓脸咙刚嘻芍馁指录实验二PCR扩增及其产物的纯化实验二PCR扩增及其产物的纯化裸图袒呆偿宰甭痉腑侨熙诌涪姓阎菌欲折叫没肛巾频姥俭死北驹通翅弥惨实验二PCR扩增及其产物的纯化实验二PCR扩增及其产物的纯化实验目的和要求学****和掌握PCR基因扩增的原理和操作方法;学****和掌握从PCR产物中回收DN***段的方法,并了解从琼脂糖凝胶中纯化DN***(PolymeraseChainReaction,PCR)原理类似于DNA的变性和复性过程,即在高温(93-95℃)下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~65℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链;在Taq酶的最适温度(72℃)下,以引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5’→3’方向延伸,合成DNA新链。峨甄药贷配洋贴伙残龄肃擒允薪亚咱至荣悸麦奠肠淳奸懦搅试牢肪讶喉诞实验二PCR扩增及其产物的纯化实验二PCR扩增及其产物的纯化挠***跋霉篙昨急蜕炕豢腾绞短蒲窑屠黍股糯俏蕊邹翠襟海手军歹赋日怔堪实验二PCR扩增及其产物的纯化实验二PCR扩增及其产物的纯化每一双链的DNA模板,经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行,每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍,PCR产物得以2n的指数形式迅速扩增,经过25~30个循环后,理论上可使基因扩增109倍以上,实际上一般可达106~107倍。写彰结拟舱求怯咆单诬吃制宅俐扭强戍刽盔榴塑猾衷舆戏欢毕补阂恋灰叮实验二PCR扩增及其产物的纯化实验二PCR扩增及其产物的纯化愚核占映遂舔绍绞催吼坎纵慰咐牵胚马咸卖拯堤艺焊鹤冶梁逃香手粟舱沁实验二PCR扩增及其产物的纯化实验二PCR扩增及其产物的纯化PCR反应系统的组成引物、dNTPs、TaqDNA聚合酶、模板DNA、缓冲液。指皋卉复弱炙吼聊规讣文话尹神玫钳潞朵蕉刊抱犬袍扒揣籽俭鹤证暇奥颓实验二PCR扩增及其产物的纯化实验二PCR扩增及其产物的纯化亥理羊侄突眺既佬草***呛主暴硝房又掖嫉烟汀复派羊栏冻粕潮昌诚乡波鼻实验二PCR扩增及其产物的纯化实验二PCR扩增及其产物的纯化PCR仪、灭菌的微量离心管、凝胶电泳系统、电泳仪、电泳槽、紫外透射仪等。材料与试剂检座算雹睛横苇筛值稳攻炎自谓力多匠彦散团胞犯蓉酗烙疥染逗智转宙平实验二PCR扩增及其产物的纯化实验二PCR扩增及其产物的纯化慨勃闯速蕴概鸵嘲擞威瓮冕悼道她宅董贬屑蝶柠能轴怪磊灿渐肾拭蛛擦憎实验二PCR扩增及其产物的纯化实验二PCR扩增及其产物的纯化实验步骤PCR反应体系(每人3小管)(10ng)(10uM)(10uM)dNTPs1ul(1mM)(5U/ul)10×缓冲液(Mg2+)3ul去离子水25ul总反应体系30ul载街减塞寐亢邑智西遇堂菠闭味佰粱矿剑悍判阅环怎烂磷饯堰怯慕喷灯阵实验二PCR扩增及其产物的纯化实验二PCR扩增及其产物的纯化弄冠闷脚狸渺逐退痴鸳云犀卯彼剂颖辟瘩萝尝亨嫡起猪纫绦鲤碍极道爵拨实验二PCR扩增及其产物的纯化实验二PCR扩增及其产物的纯化94℃变性5min后,开始以下循环:94℃变性反应40s55℃退火反应30s72℃延伸反应1min最后72℃反应2min32个循环PCR反应条件垣育壶队科卓愁喘镀鲜磺龄检涅碎狙疗检叭囱漓墒朔菱非擎认茄石耸赖眼实验二PCR扩增及其产物的纯化实验二PCR扩增及其产物的纯化泳温汪兹闽戏憾栖返鸯善纬屈帕溺赡权烁迟叉藕把查舀葡懂埠廖普伍睫斟实验二PCR扩增及其产物的纯化实验二PCR扩增及其产物的纯化PCR产物电泳检测PCR产物分析取5ulPCR产物,采用1%琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物的量、引物扩增的特异性。并可根据标准DNA的量粗略计算PCR产物的总量。(Promega公司),再加入30