文档介绍：山东大学
博士学位论文
表达轮状病毒VP6及VP7基因重组腺病毒的免疫效果研究
姓名:李勇
申请学位级别:博士
专业:病原生物学
指导教师:于修平;王健伟
20040501
佥童论文作者签名:菽沙关于学位论文使用授权的声明原创性声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学文被查阅和借阅:本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文,一丫⒚饕玫哪谌萃猓静孜牟包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文啾狙宦畚摹C苈畚脑诮饷芎笥ψ袷卮斯娑导师签名期:同日彳辛
表达轮状病毒癡基因重组腺病毒的免疫效果研究摘要第一个轮状病毒疫苗——四价重配疫苗于年戮拦鶩原,在发展中国家,每年发生中度和严重腹泻的儿童约,人,死于轮状批准进入市场,但不久因怀疑可能引发儿童的肠套叠而于次年峦V故褂谩D前正在研制的轮状病毒疫苗还有亚单位疫苗和呙纾即υ诙锸笛榻锥危毒载体表达轮状病毒保护性抗原作为疫苗。由于腺病毒能感染呼吸道和肠道,从是和型,型少见。我们前期的研究表明,利用腺病毒或质粒载体表达入轮状病毒蛟谛∈笊峡梢杂盏剂己玫拿庖叻从Γ赏糜谌寺肿床《疫苗研究。但是,由于盏嫉拿庖呤切吞匾煨缘模杂谝煨筒《镜慕徊姹护作用较弱。我们的研究表明在我国人群中流行的轮状病毒的血清型以为主,而我们在小鼠模型上使用的小鼠轮状病毒株为型,因此难以用来博士研究生:李勇师:于修平教指导教师:王健伟副研究员蕉ù笱Р≡镅а芯克槁肿床《琑是引起全世界婴幼儿严重腹泻的最重要病病毒感染的超过,鉴于轮状病毒危害严重且无有效治疗手段,世界卫生组织将发展轮状病毒疫苗列为最优先发展的疫苗项目之~。免疫保护效果差异较大,因此对于新型轮状病毒疫苗的研究还在探索之中。我们课题组对于轮状病毒基因工程疫苗进行了系统研究,,而且安全可靠,可以通过口服或滴鼻给药,适于婴幼儿使用,因此腺病毒载体成为轮状病毒基因工程疫苗载体的首选。调查结果显示,我国流行的轮状病毒以型为主,占~%以上,其次评价表达人型庖咝∈蠖訣感染的保护作用。由于原来实验室导授山东大学博士学位论文
没有鼠轮状病毒,而且小鼠对人轮状病毒不够敏感,所以课题组未能在小的免疫学效果观察试验,这都需要进一步补充。为此本研究用重组腺病毒在国内抗原闹刈橄俨《緍,经滴鼻途径分别对小鼠进行了免疫。并通过攻毒试验、赴臼匝椤⑾赴蜃印⒖固寮爸泻涂固宓牟舛ǎ芯苛酥刈该系统将小鼠株轮状病毒的主要中和抗原虿迦胫刈橄俨《,我们对所得到的重组腺病毒的特性进行了传代培养过程中,重组腺病毒基因组稳定;河肦椒ḿ觳蛋白可被山羊抗牛轮状病毒抗体所特异性识别,分子量也与小鼠轮状病毒刈橄俨《究捎盏颊衬っ庖撸卧冉汉统υ冉壕芗觳獬鼋细叩腞特异性虸水平;酆涎G濉⒎啾恪⒎卧冉汉统υ冉旱腅检测结果以及血清中和鼠模型上进行赴臼匝楹凸ザ臼匝榈雀苤っ髦刈橄俨《久庖弑;ぷ饔,并应用课题组己包装成功的表达轮状病毒组特异性腺病毒和谛∈竽P蜕系拿庖弑;ばЧ是利用系统构建的区缺失的复制缺陷型腺病毒。利用中,置于⒓丛缙谄舳雍蚐缛重组腺病毒H细胞后获得了目的重组腺病毒。较为全面的研究。和干涞缇倒鄄斓剿玫降闹刈橄俨《緍本对嘉,具有较为典型的腺病毒形态;篜鉴定表明重组腺病毒中,稳定地整合有小鼠株轮状病毒幕颍籆:ū砻髟诹了重组腺病毒感染细胞中的匾煨詍峁砻鱒基因可被有效地转录;篧实验中,重组腺病毒表达的分子量相当。我们对通过滴鼻途径免疫重组腺病毒或男∈蠼辛多项免疫学指标检测与分析,发现:街种刈橄俨《久庖咝∈缶苡盏夹∈蟛锨康恼攵月肿床《镜难Gザ竞蠹霳鼠粪便的排毒量发现,免疫组抑制排毒的效果明显好于对照组,均显示了较好的免疫保护作用;首次表达了虸;山东大学博士学位论文
抗体效价测定结果,发现重组腺病毒对小鼠产生的攻毒保护作用与粪便中的特异性烧喙兀撇夥啾阒械腞匾煨訧可能在保护作用中起关键作τ梅鸩ズ透评胱釉靥逵盏嫉目帕uッ阜置诜ǘ灾刈橄俨《久庖咝∈的钚苑治霰砻髁街种刈橄俨《久庖咝∈缶苡盏夹∈蟛鶦活性,提示在对抗轮状病毒感染中,赴榈嫉牡南赴庖呖赡芤卜⒒又匾5拿推断重组腺病毒疫苗免疫小鼠既产生体液免疫又产生细胞免疫,其中另外,为了进一步评价重组腺病毒的免疫反应性以及安全性,我们以非人灵长类