文档介绍：中英文缩略词表英文缩略词英文全称中文名称氨基酸腺病毒氨卞青霉素牛血清白蛋白巨细胞病毒十二烷基硫酸钠增强化学发光过硫酸铵四甲基乙二胺乙二胺四乙酸溴化乙锭碱基对千碱基对埃希氏大肠杆菌改嘌反转重复序列开放阅读框三羧酸甲基氨基甲烷安徽医科大学硕士学位论文瓹’
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人呼吸道合胞病毒鞍追歉粗菩拖俨《局刈樘宓构建和鉴定中文摘要目的:人呼吸道合胞病毒琑惴悍植加世界各地,是导致婴幼儿严重下呼吸道感染的最重要的病毒病原。目前尚无特异性防治方法,世界卫生组织将发展呙缌形W钣畔确⒄沟囊呙缦钅恐弧值鞍字校ゐじ教堑鞍珿侵泻涂乖免疫动物后,可以产生具有免疫保护作用的中和抗体,为新型疫苗候选抗原。本文利用同源重组方法,获得表达鞍椎姆歉粗菩拖俨《局刈樘澹L迥诿庖咝果和免疫保护作用研究奠定基础。方法:本研究依据章嫉腁亚型株碱基序列章己盼杓撇⒑铣梢欢蕴匾煨砸铮肦际酰痈腥綬的细胞中获得蚱危寺〉絧甌载体。经核酸序列分析正确后,进一步亚克隆到真核表达载体.,,脂质体法转染细胞,和鉴定基因转录和蛋白表达。,┧笾柿C盖屑ê螅琍咝曰痯利用电穿孑ㄗ;际酰严咝詐H牒衟一拇蟪Ω司鶨./薪型粗刈椋竦弥刈橄俨《局柿/。酶切鉴定后,以盖衟/,脂质体法转染赴4鱿值湫偷闹孪赴”湫应,后,取细胞裂解液,以康幕表达。结果:⑸
蛴凶B迹琖分析观察到鞍滋匾煨缘谋泶锾醮V刈榇┧质粒和重组腺病毒质粒疪盖屑ā篎确。疪訮酶切后,用脂质体法转染赴鄄斓较赴鱿諧,用分析,检测到虻谋泶铩结论:成功克隆切蚏株颍⒃谡婧讼赴谢竦帽泶铩;竦靡株可表达切蚏鞍椎姆歉粗菩拖俨《局刈樘錐疪捎糜谔迥研究观察其免疫效果及免疫保护作用。关键词:人呼吸道合胞病毒鞍真核表达非复制型腺病毒重组体安徽医科大学硕士学位论文
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人呼吸道合胞病毒鞍追歉粗菩拖俨《局组体的构建和鉴定把惴悍植加谑澜绺鞯兀腥巳航钥筛腥荆悦庖吡Φ拖碌挠び锥⒗人和病人为剧,据统计,在婴幼儿%的毛细支气管炎和两岁前%肺炎是由鸬模堑贾掠び锥现叵潞粑栏腥镜淖钪匾5牟《静≡。起的呼吸道疾病对家庭和社会带来很大负担,迄今为止,腥救晕抻行У闹疗方法,预防仍是全球性的目标,因此,发展一种安全、有效的呙缡强蒲工作者的首要任务之一【。粲诟别げ《究疲窝撞《臼簦5ス筛毫碦病毒。蜃楣编码种蛋白,其中包膜融合糖蛋白,和鞍自诙模型中能诱导中和抗体和保护性免疫应答的产生【俊K荝结构蛋白中变异最显著的蛋白,根据鞍装被嵝蛄械牟钜欤玆分为两个抗原亚型【荝主要的黏附蛋白,其胞内区与其他黏蛋白相似,功能相当于其他副黏病毒属的、鞍祝淙ǔ挥衅渌别げ《臼舻囊话氤度,二者结构和序列上并无相关性及同源性。作为型跨膜糖蛋白,砂谇⒖,是一个未被蛋白酶水解的信号肽和膜锚定位点,嗽既种牟糠衷谙赴狻的保守区域主要在跨膜区和胞内区,亚型间有%的相同,变异主要在胞外区,亚型间只有%的相同。在跨膜区和胞内区,脯氨酸的定位和疏水区的序列是保守的,说明母呒蹲橹峁故潜J氐摹T诎馇」芡ǔ一、一糖化位点的定位相似,但这些区域的序列很少是保守的,中间的安徽医科大学硕士学位论文。
薹。一蝴扣序列高度保守,这个保守区内几乎没有糖基化位点,而且有四个半胱氨酸、、共同紧紧缠绕成半胱氨酸套索的二级结构—。研究发现针对这一区域抗原表位的抗体可以中和所有株的病毒,起到免疫保护作用【俊同时也存在分泌型的鞍祝浜铣煽J加诳缒蛋白开放读码框,内的第二个蛄蟹治隹杉淙鄙倭薔一端个或个,也就缺少了膜锚定位点,所以分泌型潜坏鞍姿饷杆解修饰后的产物【”。,,测序正确后,亚克隆入.,用—技术验证虻淖B己捅泶铮傺强寺〉较俨《敬┧笾柿#竦弥刈橄俨《敬┧笾粒,然后在生长周期短,便于操作的甤细胞内进行腺病毒骨架质粒与重组穿梭载体的同源重组,经过对重组腺病毒质粒酶切分析、去除重组质粒的原核复制原点和转染跋赴档冉徊讲僮鳎钪盏玫娇杀泶颎蛋白的非复制型腺病毒重组体,并用检钡紾蛋白的表达。可表达泻涂乖璆蛋白的非复制型腺病毒重组体的的成功构建,为进一步进行体内免疫学效果和免疫学保