文档介绍：顶空气相色谱法测定血液中乙醇含量的探索
作者:李周儒于常州蔡红星
【摘要】目的建立检测血液中乙醇含量简便、准确的方法。方法以叔丁醇作为内标,用顶空气相色谱火焰离子化检测器对样品进行检测,与平行操作的乙醇标准品比较,用内标法以乙醇对内标物的峰面积比进行定量。结果色谱图上目标峰与内标峰分离完全,~ g/L范围内标准工作曲线线性关系良好。结论顶空气相色谱法测定血液中乙醇含量快速灵敏,能准确定量。该方法可用于实际检测分析。
【关键词】气相色谱顶空法血液乙醇含量测定
血液中乙醇浓度的高低,是判定一个人清醒程度的重要指标。目前国内大多采用国标法测定,即重铬酸钾氧化硫酸亚铁铵滴定法。该法花费时间长,条件不易控制。由于血液中含有各种蛋白质和胶状物质,比较黏稠,因此不能采用直接气相色谱法测定。本实验采用顶空气相色谱法,通过对待检血样进行适当处理和色谱条件的摸索,从而对实验方法有所改进。
1 材料和方法
主要仪器 TP2100气相色谱仪,配有火焰离子化检测器和色谱数据工作站。
试剂空白抗凝血,无水乙醇(分析纯),叔丁醇(分析纯,内标物)。
试剂配置
乙醇标准储备液、 ml()、 ml( 7)于100 ml容量瓶中,用重蒸水稀释至刻度,混匀,分别得浓度为10 g/L的乙醇标准储备液、叔丁醇标准储备液。置4℃冰箱保存(可保存1年)。
乙醇标准工作液、叔丁醇标准工作液分别吸取一定量的乙醇标准储备液和叔丁醇标准储备液,用重蒸水稀释10倍,分别得浓度为1 g/L的乙醇标准工作液和叔丁醇标准工作液。
色谱条件色谱柱Hayes EPQ 2 M×2 mm,柱温120℃,检测室温度250℃,气化室温度250℃,载气(N2)~ L/min,燃气和空气流速根据仪器条件选定。
ml,分别加入样品瓶中,加100 μl(1 g/L)叔丁醇标准工作液作为内标,用密封钳加封铝帽,密封好瓶塞,混匀,置60℃恒温水浴箱内,水浴15 min。
另取空白全血2份,根据待测血液中乙醇含量的多少(目测乙醇峰面积的大小),添加相应的乙醇标准工作液(20 μg~2 mg),内标液按上述方法平行操作,作为已知对照。
样品检测用2 ml注射器分别吸取检材、 ml,注入气相色谱仪中,每个试样进样2次;并注入乙醇标准工作液。
标准曲线的制作将10 g/L的乙醇标准储备液用重蒸水分别稀释10、100、1000倍,得浓度分别为1、、 g/L的乙醇标准液,
5、、、 ml的1 g/L乙醇标准液,、 g/L乙醇标准液,、 g/L乙醇标准液, ml的1 g/L叔丁醇标准工作液做内标,检测后制作标准工作曲线。见表1。
记录与计算记录检材及已知对照中乙醇及内标峰面积值,填入GC定量分析记录表中,并计算出各检材中乙醇及内标的平均峰面积。表1 标准工作曲线相关数据乙醇添加