文档介绍：纯度检测:-PAGE测定LDL纯度
含量测定:
-酚试剂法测定LDL含量
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析LDL纯度
一、目的要求

-聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳(SDS-PAGE)分离蛋白质技术
电泳概述:
电泳:带电荷的质点,在一定条件的电场作用下,可向一极移动,如带正电荷的质点移向负极,这种现象称为电泳。
影响电泳的主要因素:
1) 电泳介质的pH
2) 缓冲液的离子强度
3) 电场强度
4) 电渗作用
5) 对支持物的选择
6) 温度对电泳的影响
电泳分类:
按原理分:区带电泳、移界电泳、等速电泳、聚焦电泳
二、原理
聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂N,N,N,N—四甲基乙二胺(TEMED)和催化剂过硫酸铵(APS)或核黄素的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶,以此凝胶为支持物的区带电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。
聚丙烯酰胺凝胶有下列特性:
(1)在一定浓度时,凝胶透明,有弹性,机械性能好;
(2)化学性能稳定,与被分离物不起化学反应,在很多溶剂中不溶;
(3)对pH和温度变化较稳定;
(4)几乎无吸附和电渗作用,只要Acr纯度高,操作条件一致,则样品分离重复性好;
(5)样品不易扩散,且用量少,其灵敏度可达10-6g
(6)凝胶孔径可调节,根据被分离物的分子量选择合适的浓度,通过改变单体及交联剂的浓度调节凝胶的孔径;
(7)分辨率高,尤其在不连续凝胶电泳中,集浓缩、分子筛和电荷效应为一体。因而较醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等有更高的分辨率。
凝胶浓度(T)的选择与被分离物质分子量密切相关。
分子量范围与凝胶浓度的关系
分子量范围适用的凝胶浓度/(%)
蛋白质
104 20-30
1-4×104 15-20
1-5×104-1×105 10-15
1×105 5-10
5×105 2-5
核酸(RNA)
104 15–20
104–105 5-10
105-2×106 2-
聚丙烯酰胺凝胶电泳分为连续系统与不连续系统两大类。
目前常用的多为圆盘电泳(如图1)和板状电泳(如图2),两者电泳原理完全相同。
图1 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳示意图(A为正面,B为剖面)(1) (2) (3) (4)
图2 夹心垂直板电泳槽示意图图3
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