RT-PCR法克隆目的基因构建表达hVEGF165的慢病毒载体.doc

文档介绍：
RT-PCR 法克隆目的基因构建表达
hVEGF165 的慢病毒载体#
焦自钊,薛武军,田晓辉,李杨**
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(西安交通大学医学院第一附属医院肾脏病医院肾移植科,西安 710061)
摘要:目的应用 RT-PCR 法克隆目的基因,构建表达 hVEGF165 基因的慢病毒载体。方法
应用 RT-PCR 技术克隆目的基因 hVEGF165 片段, 并克隆于慢病毒骨架质粒
pLVX-EF1α-IRES2-AcGFP1 中,构建慢病毒载体 pLVX-EF1α-hVEGF165-IRES2-AcGFP1,
菌落 PCR 及测序分析加以鉴定。慢病毒载体主体质粒 pLVX-EF1α-
hVEGF165-IRES2-AcGFP1,辅助质粒 gag-pro、vpr-pol、Tet-Off®、tat-IRES-rev 和包膜质粒
env(VSV-G)共转染 Lenti-X 293T 细胞,包装慢病毒载体并测定滴度。结果:成功克隆了
目的基因 hVEGF165 片段,构建的慢病毒载体 pLVX-EF1α- hVEGF165-IRES2-AcGFP1 经菌
落 PCR 鉴定存在目的基因 hVEGF165 片段,测序分析证实与 Genbank 报道的 hVEGF165 基
因序列完全一致。六质粒共转染 Lenti-X 293T 细胞后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光。包
装后慢病毒测定滴度为 1×108TU/mL。结论: 经 RT-PCR 法克隆目的基因,成功构建了表
达 hVEGF165 基因的慢病毒载体。
关键词:慢病毒载体;RT-PCR;基因克隆;VEGF
中图分类号:Q782
Construction of lentivirus vectors expressing hVEGF165
gene by RT-PCR to clone target gene
JIAO Zizhao, XUE Wujun, TIAN Xiaohui, LI Yaang
(Department of Renal Tansplantation, Hospital of Nephropathy, The First Affiliated Hospital,
Medical Collage, Xian Jiaotong University, Xian 710061)
Abstract: Abstract: Objective To clone target gene by RT-PCR method and construct lentivirus
vectors expressing hVEGF165 gene. Methods RT-PCR technology was employed to clone
hVEGF165 gene,and this gene was cloned to lentivirus vector pLVX-EF1α-IRES2-AcGFP1 to
construct a lentiviral vector pLVX-EF1α-hVEGF165-IRES2-AcGFP1, Bacterial colonies PCR
and sequencing an